多粘类芽胞杆菌LB-9的诱变及抑菌防病效果研究

发布时间：2021-08-09 01:35

　　为获得对烟草疫霉菌生防效果更佳的拮抗菌株,对多粘类芽胞杆菌LB-9进行基因诱变。利用原生质体电转化法,构建了菌株LB-9的Tn-5转座插入突变体库,获得约2000个转化子,通过平板对峙法筛选出对烟草疫霉菌拮抗能力增强且效果稳定的突变菌株3个,其中编号为A13的突变菌株对烟草疫霉菌的抑制效果达到80%以上,与原始菌株LB-9的抑菌率相比提高了20%以上。采用室内盆栽接种法研究了正突变菌株A13对烟草黑胫病的防控效果,并利用实时荧光定量PCR法初步分析了其诱导烟株体内抗病相关基因的表达。结果表明,正突变菌株A13处理烟株7d后,对烟草黑胫病的防效高于原始菌株LB-9,防效可达80%以上,同时可诱导烟株体内不同信号通路中抗性相关基因的上调表达。本研究为多粘类芽胞杆菌插入诱变育种方法研究提供了理论支撑,对烟草黑胫病的生物防治具有重要意义。 

【文章来源】：中国生物防治学报. 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

利用原生质体电转化法获得的转化子

根据Ez-Tn5的卡那霉素抗性基因设计特异性引物对Kan-F/Kan-R，对随机挑选的20个转化子进行PCR扩增，均能得到约500 bp的目的片段，而原始菌株LB-9中未扩出相应的条带（图2）。由此说明转座子已成功插入到LB-9基因组中。2.3 多粘类芽胞杆菌LB-9插入突变菌株对烟草疫霉菌的抑制效果

荧光定量PCR结果表明，在灌施正突变菌株A13发酵液后接种烟草疫霉菌12 h，就可诱导烟株体内水杨酸信号通路关键基因PR1a的上调表达，随着接种时间延长，基因表达量不断增加，且显著高于原始菌株LB-9诱导的基因表达量。接种72 h后，可诱导乙烯信号通路、茉莉酸信号通路关键基因PR3b、COI1的显著上调表达，而乙烯信号通路标志基因PDF1.2的表达量显著下降（图3）。由此说明，拮抗菌LB-9和正突变菌株A13诱导的烟株对烟草黑胫病的抗性可能与植物激素信号通路相关。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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本文编号：3331094