香蕉细菌性枯萎病菌荧光LAMP检测体系的建立

发布时间：2021-11-02 02:04

　　【目的】基于香蕉细菌性枯萎病病原（Ralstonia solanacearum）2号生理小种的特异保守引物和LAMP技术建立一种实时荧光定性检测方法,解决常规PCR定性检测特异性低、灵敏度低、耗时长等问题,实现在1 h内能进行准确高效的定性检测,为加强该病害防控检测和检疫工作提供技术支持。【方法】确定被测基因靶序列,利用Primer软件设计两对内外引物。由两对引物、具有链置换特性的DNA聚合酶、模板DNA、甜菜碱、Mg₂SO₄、反应缓冲液、荧光染料等组成LAMP反应体系,采用不必在反应完开管盖检测的实时荧光LAMP方法,针对该方法对于样品DNA定性检测的灵敏度、特异性及可重复性进行试验。【结果】设计的引物能顺利扩增目标基因,实时荧光LAMP检测体系对于香蕉细菌性枯萎病病原生理2号小种有良好的灵敏度、特异性,该方法可重复性强,灵敏度比普通PCR高10倍以上。【结论】香蕉细菌性枯萎病菌荧光LAMP检测体系检测特异性强、灵敏度高、耗时短、不易污染,效果较好。 

【文章来源】：广东农业科学. 2020,47(05)

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

实时荧光LAMP对RS2及其近似种特异性检测结果

重复性实验结果(图3)表明,除阴性对照与空白对照外,样品组4个重复实验体系的检测结果都能出现“S”型曲线,说明本实验所建立的方法对RS2的DNA检测具有较高的重复性,结果稳定性好,实验方法可靠。图3 实时荧光LAMP对RS2重复性检测结果

实时荧光LAMP对RS2重复性检测结果

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3471129