多肉植物红心莲茎腐病尖孢镰刀菌LAMP快速检测技术的建立

发布时间：2021-11-13 20:19

　　【目的】建立一种景天科多肉植物红心莲茎腐病菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）快速、简便、灵敏的LAMP可视化检测方法,在茎腐病发生初期实现病原菌的快速准确检测,为病害的早期监测、诊断及防治提供依据。【方法】以EF-1a（Elongation factor-1α）基因序列为靶序列,设计LAMP（Loopmediated isothermal amplification）特异性引物;以红心莲尖孢镰刀菌DNA为模板,优化反应温度和反应时间,建立LAMP检测反应体系,开展特异性和灵敏度验证及田间病株检测。【结果】建立的LAMP反应体系可有效检测出多肉植物红心莲茎腐病尖孢镰刀菌,最佳反应温度、反应时间分别为65℃,60 min;特异性验证表明红心莲尖孢镰刀菌DNA呈绿色阳性反应,灵敏度验证表明LAMP检测最小质量浓度是10 fg·μL-1,比常规PCR提高了10倍;采用LAMP法对15份疑似红心莲茎腐病田间样本进行快速检测,检出率为100%。【结论】本研究建立的多肉植物红心莲茎腐病菌LAMP快速检测方法不仅特异性强、灵敏度高,而且检测结果可视、假阳性低,适合田间尖孢镰刀菌引起的... 

【文章来源】：福建农业学报. 2020,35(08)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

LAMP灵敏度检测验证

特异性验证：对27株供试菌株进行LAMP检测，通过观察LAMP产物颜色判定扩增结果；后从反应菌株中挑选1株从红心莲上分离的F.oxysporum,3株从多肉植物上分离的Colletotrichum destructivum、Corynespora cassiicola和Alternaria alternata,3株从其他寄主植物上分离的镰刀菌属菌株F.moniliforme、F.solani和F.sporotrichioides，共7株菌株进行琼脂糖凝胶电泳，以无菌双蒸水为阴性对照，通过判定电泳梯形条带的有无验证LAMP检测的特异性。试验设3次重复。灵敏度验证：将红心莲尖孢镰刀菌样本DNA按10倍浓度梯度依次稀释为10 ng·μL-1～1 fg·μL-18个不同浓度，同时进行LAMP检测和PCR检测，比对2种检测方法的灵敏度差异；试验设3次重复。

LAMP检测结果可靠性验证表明，阳性对照呈绿色，对应的琼脂糖凝胶电泳扩增出梯形条带；阴性对照呈现黄绿色，琼脂糖凝胶电泳无梯形条带（图3）。表明建立的LAMP检测方法可行，能可靠检测到红心莲尖孢镰刀菌F.oxysporum。图3 LAMP检测红心莲尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum

【参考文献】：
期刊论文
[1]马铃薯S病毒PVSO株系RT-LAMP检测方法的建立及应用[J]. 李华伟,许泳清,罗文彬,纪荣昌,刘中华,许国春,张鸿,李国良,林赵淼,邱永祥,邱思鑫,汤浩.  园艺学报. 2018(08)
[2]燕麦镰孢菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立与应用[J]. 漆永红,曹素芳,李雪萍,李敏权.  草地学报. 2018(04)
[3]大豆茎褐腐病菌环介导等温扩增检测技术的建立[J]. 吴旭东,陆辰晨,沈浩,吴翠萍,张海峰,王源超,郑小波.  南京农业大学学报. 2015(04)
[4]河北和内蒙古马铃薯干腐病菌种类鉴定[J]. 魏巍,朱杰华,张宏磊,杨志辉.  植物保护学报. 2013(04)

硕士论文
[1]应用LAMP检测技术快速诊断大豆根茎部真菌病害[D]. 宋必.南京农业大学 2015



本文编号：3493655