松材线虫galectin-1基因的克

发布时间：2021-11-22 04:53

　　【目的】galectin-1是凝集素的一种,广泛存在于各种生物体内,在生长发育、免疫调节方面起重要作用。本研究克隆和表达了松材线虫的galectin-1蛋白,并分析了各个龄期的表达量。【方法】设计引物,扩增松材线虫的galectin-1基因,使用双酶切的方法连接p ET-28a载体和目的基因,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆;在不同温度下,用不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,Western blot检验蛋白表达情况;采用RT-PCR技术检验松材线虫各个龄期galectin-1基因的表达情况。【结果】由SMART和Predict Protein软件分析可知,该蛋白有2个结构域,并且主要由无规卷曲和β折叠构成;生物学信息分析显示,松材线虫的galectin-1与小卷蛾斯氏线虫的相似性更高;与日本血吸虫相比,线虫能很好地聚集在一个分支上。Western blot检测纯化蛋白大小与查询所得蛋白分子质量一致。RT-q PCR结果显示,以繁殖型2龄松材线虫（L₂）为对照,galectin-1基因在繁殖型3龄（L₃）... 

【文章来源】：生物安全学报. 2020,29(02)CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

松材线虫galectin-1蛋白结构域的预测

由PredictProtein软件分析可知，galectin-1蛋白的二级结构中无规卷曲占54.35%，β折叠占45.65%，没有α螺旋。使用SWISS-MODEL软件对galectin-1蛋白同源建模，显示出该蛋白主要由无规卷曲和β折叠组成，结果与Predict Protein软件一致。每个半乳凝素中，2个CRD的结构相似，每个CRD具有典型的半乳凝素折叠，该褶皱由反平行的β-折叠构成，β-折叠由β-三明治组合组成，没有任何α-螺旋(图2)。2.4 松材线虫galectin-1同源序列对比及系统发育树

通过对松材线虫galectin-1蛋白序列的blast与氨基酸系列分析(图3)，发现松材线虫与小卷蛾斯氏线虫Steinernema carpocapsae(Weiser)(TMS35925.1)的相似性最高，为84.36%;与鼠类圆线虫Strongyloides ratti Sandground(XP＿024498502.1)相似性为82.01%。以日本血吸虫Schistosoma japonicum Katsurada为外群，用MAGE 7.0建立成系统发育树(图4)，线虫都聚集在一个大分支上，而小卷蛾斯氏线虫、鼠类圆线虫和秀丽杆线虫Caenorhabditis elegans在同一个小分支上，与blast的结果一致。图4 galectin-1与其同源基因基于氨基酸序列构建的进化树(邻接法)

【参考文献】：
期刊论文
[1]携带与非携带松材线虫的松墨天牛miRNA表达谱比较分析[J]. 宁静,张宾,田浩楷,柳小龙,杨炳琰,赵莉蔺.  生物安全学报. 2018(01)
[2]广州管圆线虫半乳凝素基因的克隆表达、蛋白纯化及免疫反应性研究[J]. 郝丽,吴焜,陈晓光,王琼.  南方医科大学学报. 2007(05)



本文编号：3510979