解淀粉芽孢杆菌TF28活菌定量PMA-qPCR技术

发布时间：2023-09-14 02:30

　　[目的]建立解淀粉芽孢杆菌TF28特异性活菌分子定量技术。[方法]基于TF28特有基因设计q PCR引物,建立菌株特异性q PCR技术;优化PMA处理条件,建立PMA-q PCR定量TF28活菌技术,对其特异性、灵敏性与可靠性进行检测。[结果]建立的q PCR技术对菌株TF28具有特异性。优化的PMA处理条件为:PMA终浓度150μmol/L、暗培养10 min、光照20 min,在此条件下,可封闭106cfu/m L以下死菌基因组DNA;建立的PMA-q PCR技术特异性强,灵敏度高,最低检测限102cfu/m L;线性关系好,R2=0.997;在菌浓度103cfu/m L～107cfu/m L范围内重复性好,CT值变异系数小于2%,与平板活菌计数比较,差异不显著。[结论]建立的PMA-q PCR技术对TF28具有特异性,能够对菌浓度103cfu/m L～107cfu/m L活菌进行定量。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
        1.1.4 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计及特异性检测
        1.2.2 常规PCR和q PCR方法的建立
        1.2.3 PMA处理条件优化
        1.2.4 PMA-q PCR灵敏性与稳定性及与平板计数法的比较
        1.2.5 数据处理
2 结果与分析
    2.1 引物设计与特异性检测
    2.2 PMA处理条件优化
    2.3 PMA-q PCR灵敏性与稳定性及其与平板计数法的比较
3 讨论
4 结论



本文编号：3846381