北京市科委网站_Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体基因多态性与福建地区 高血压的关系

  本文关键词：福建省科委基金，由笔耕文化传播整理发布。

血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)是已知内源性升压物质中作用最强的激素之一，在高血压发病中起着重要作用。AngⅡ的绝大多数生物学作用是由Ⅰ型受体(AT1R)介导的［1］。1994年Bonnardeaux等［2］发现在高血压患者中AT1R基因C1166等位基因频率高于正常者。目前国内有关研究不多，样本数均较少，结论不一［3，4］，我们对福建地区人群进行了研究，报告如下。

1　对象与方法

1.1　对象　均为福建地区汉族人。其中原发性高血压患者120例，来自本院心内科，高血压按WHO诊断标准，排除冠心病、糖尿病及继发性高血压，高血压家族史定义为父母或同胞兄弟姐妹中至少有1位患高血压病。86名正常人来自健康体检者，排除高血压病等。
1.2　方法
1.2.1　测定部分临床指标　测定血压、身高、体重、空腹血糖(Glu)、总胆固醇(TCH)及甘油三酯(TG)浓度。
1.2.2　饱和盐析法提取基因组DNA。
1.2.3　目的片段扩增　PCR引物序列为［5］：上游5′-ATA-ATGTAAGCTCATCCACC；下游5′-GAGATTGCATTTCT-GTCAGT。PCR反应总体积30 μl，其中DNA模板约100 ng，dNTP 200 μmol/L,上下游引物各20 pmol,10×缓冲液3 μl,MgCl2 2.0 mmol/L,Taq酶1 U。PCR反应设置为93 ℃预变性3 min后，93℃变性40 s，55 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min,共35个循环，最后72℃延伸10 min。扩增产物用1.7%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下检测。
1.2.4　基因型的判断　取6 μl PCR产物，DdeⅠ内切酶(Promega公司)6U，10×缓冲液1.5 μl,灭菌的去离子双蒸水6.9 μl,反应总体积15 μl.在37℃酶切4 h。产物用2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，，紫外灯下检测。Marker采用100 bp的DNA 1adder(MBI公司)。
1.2.5　统计学分析　用SPSS统计软件处理。正常组与对照组临床指标的比较采用ANOVA检验，基因型及基因频率比较用χ2检验。

2　结果

2.1　原发性高血压组与正常组临床指标比较　高血压组除收缩压、舒张压显著高于对照组，年龄、体重指数、空腹血糖、TCH、TG两组间差异无显著性，见表1。

表1　临床各项指标在高血压组和对照组中的比较

项目 对照组 原发性高血压组

例数 86 120

年龄(岁) 49.47± 9.59 53.36± 10.12

性别(男/女) 54/ 32 66/ 54

体重指数(kg/m2) 23.08± 2.74 24.91± 3.22

血糖(mmol/L) 5.02± 0.48 5.08± 0.64

总胆固醇(mmol/L) 4.96± 1.01 5.18± 0.82

甘油三酯(mmol/L) 1.59± 1.05 2.02± 1.04

收缩压(mmHg) 120.48± 10.36 169.15± 28.36*　*

舒张压(mmHg) 76.27± 8.44 97.98± 16.15*　*

　　**：与对照组比较P＜0.01

2.2　EH患者与正常人AT1R基因多态性比较　共扩增成功116例EH患者和86名正常人DNA标本。PCR扩增产物为360 bp片段，若扩增片段中存在A1166→C碱基替换，则产生DdeⅠ切点，经酶切后产生220 bp和140 bp左右的2个片段，因此AA基因型只有1个片段，AC基因型有3个片段，CC基因型有2个片段。检测的所有标本中均未发现CC纯合子，见图1。

图1　DdelⅠ内切酶检测的AT1 R基因型

　　高血压组与正常组AT1R基因型和C1166等位基因频率比较：EH患者AC基因型频率显著高于正常对照组，P＜0.01；C1166等位基因频率也高于正常对照组，P＜0.05。所检测的116位EH患者中，73例有高血压家族史，43例无高血压家族史。有家族史EH组AC基因型及C1166等位基因频率不仅比正常对照组高，P＜0.01，而且也高于无家族史EH组，P＜0.05，见表2。
2.3　高血压组与正常对照组C1166等位基因频率比较(性别分组)　女性高血压患者中C1166等位基因频率显著高于女性正常对照组，P＜0.05；男性高血压患者与男性正常对照组间C1166等位频率差异无显著性，见表3。

表2　EH组与对照组AT1R基因型及等位基因频率比较

组别 例数 基因型频率 等位基因频率

AA AC CC A C

对照组 86 81(0.942) 5(0.058) 0 167(0.971) 5(0.029)

EH组 116 95(0.819) 21(0.181)a 0 211(0.909) 21(0.091)b

　无家族史 43 40(0.930) 3(0.070) 0 83(0.965) 3(0.035)

　有家族史 73 55(0.753) 18(0.247)c,e 0 128(0.877) 18(0.123)d,f

　　a:χ2=6.65,与对照组比较P＜0.01；b:χ2=6.19,与对照组比较P＜0.05；c:χ2=11.33,与对照组比较P＜0.01;d:χ2=10.45,与对照组比较P＜0.01；e:χ2=5.71,与无高血压家族史EH患者比较P＜0.05；f:χ2=5.14,与无高血压家族史EH患者比较P＜0.05

表3　等位基因频率在不同性别EH组和对照中的分布

等位基因 等位基因频率

男性 女性

对照组(n＝54) EH(n＝64) 对照组(n＝32) EH(n＝52)

A 105(0.972) 120(0.938) 62(0.969) 91(0.875)

C 　　3(0.028) 　　8(0.072) 　2(0.031) 　13(0.125)*

　　* χ2=4.28,与女性对照组比较P＜0.05

2.4　中国汉族人与欧洲白人［5］的AT1R各基因型频率比较　中国汉族人AC、CC基因型频率比Bonnardeaux所检测的欧洲白人相应基因型频率低，P＜0.01，见表4。

表4　白种人与中国汉族人AT1R基因型频率比较

种族 例数 基因型频率 χ2 P值

AA AC CC

汉族人 　86 81(0.942) 　　5(0.058) 0

欧洲白人 298 153(0.513) 121(0.406) 24(0.081) 51.84 ＜0.01

3　讨论

　　中国福建汉族人群的研究结果证明了AT1R基因A1166C多态性与EH的关系，高血压病患者C1166等位基因频率明显高于正常人。我们检测到的正常汉族人的AC及CC基因型频率明显低于Bonnardeaux所检测的欧洲白人相应基因型频率，反映了不同种族基因频率存在差异。
　　我们将EH患者按有无高血压病家族史分为两组进行比较，发现有高血压病家族史的EH患者AC基因型频率以及C等位基因频率高于无家族史的EH患者，这可能与有高血压病家族史的患者遗传易感性增高有关。将EH组按性别分组后，发现女性EH患者C等位基因频率高于女性正常对照组，而男性EH患者与男性正常组间C1166等位基因频率没有差异。这个结果同Triet［6］的研究结论相似，我们认为C1166等位基因可能是女性高血压病的一个易感基因。
　　我们研究的结果提示AT1R基因可能是中国人高血压病的相关基因之一

基金资助：福建省科委基金(No.98A061)
作者单位：林从容（350005　福州，福建医科大学附属第一医院福建省高血压研究所）
吴可贵（350005　福州，福建医科大学附属第一医院福建省高血压研究所）
谢良地（350005　福州，福建医科大学附属第一医院福建省高血压研究所）
叶琼（350005　福州，福建医科大学附属第一医院福建省高血压研究所）

参考文献

1，Smith RD.Timmermans PBMWN.Human angiotensin receptor subtypes.Curr Opin Nephrol Hypertens,1994,3∶112-122.
2，Bonnardeaux A,Davies E,Jeunemaitre X,et al.Angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor gene polymorphisms in human essential hypertension.Hypertension,1994,24∶63-69.
3，项坤三，郑泰山，孙多奇，等.Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体基因多态性与中国人冠心病、高血压及糖尿病的关系.中华医学遗传学杂志，1998，15∶9-12.
4，樊红，李少英，顾维娟，等.血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体与原发性高血压的相关性研究.中华医学遗传学杂志，1998，15∶101-103.
5，Katsuya T,Koite G,Yee TW,et al.Association of angiotensinogen T235 variant with increased risk of coronary heart disease.Lancet,1995,345∶1600-1603.
6，Triet L,Blanc H,Ruidavet JB,et al.Gene polymorphisms of the renin angiotensin system in relation to hypertension and parental history of myocardial infarction and stroke:the pegase study.J Hypertens,1998,16∶37-44

  本文关键词：福建省科委基金，由笔耕文化传播整理发布。