巴西橡胶树橡胶转移酶激活因子HbRTA的克

发布时间：2022-01-13 21:30

　　为深入了解天然橡胶次生代谢生物合成过程,本研究从橡胶树胶乳中分离得到一个橡胶转移酶激活因子基因HbRTA,并对其进行了克隆、表达、定位以及生物学分析。结果表明,HbRTA的基因组序列为3 632 bp,含有7个外显子和6个内含子,其开放阅读框（ORF）为774 bp,编码蛋白含257个氨基酸,分子量为29.38 kD,理论等电点为8.57。酵母实验及亚细胞定位表明,HbRTA蛋白没有转录激活活性,且定位在细胞质中。实时荧光定量PCR分析发现,HbRTA在叶片、雌花、雄花、胶乳、树皮中均表达,其中胶乳表达量高于其它组织,并且胶乳中该基因的表达受割胶、茉莉酸（JA）和乙烯利（ET）刺激的影响。综合分析结果推测:HbRTA的表达可能与巴西橡胶树橡胶生物合成及胶乳产量有关。 

【文章来源】：分子植物育种. 2020,18(23)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

Hb RTA基因的核苷酸序列和推测氨基酸序列

图3 橡胶树Hb RTA蛋白与其他植物同源蛋白的系统进化树采用SOPMA (http://pbil.ibcp.fr/)软件对Hb RTA蛋白进行二级结构在线预测，结果显示该蛋白有136个α-螺旋(α-helix)、29个延伸带(Extended strand)、11个β转变(β-turn)、81个无规则卷曲构成，占比分别为α-螺旋(52.92%)、延伸带(11.28%)、β转变(4.28%)、无规则卷曲(31.52%)。通过SWISS-MO-DEL软件在线分析其二级结构(图4 B)，所得结果与二级结构预测基本一致，进一步验证了Hb RTA结构的正确性。

酵母实验结果显示：已转入阳性对照Hb NAC24转录因子、p GBKT7-Hb RTA以及阴性对照p GBKT7质粒的酵母Y2HGold均能在缺陷培养基SD/-Trp上生长，表明成功构建诱饵表达载体，质粒已经顺利转入Y2HGold酵母感受态细胞中。携带p GBKT7-HbRTA和阴性对照p GBKT7质粒的酵母Y2HGold在三缺培养基SD/-Trp/-Ade/-His上不能正常生长，而阳性对照携带Hb NAC24转录因子质粒的酵母能够正常生长并且变蓝(图6)，表明Hb RTA编码的蛋白没有自激活活性。1.5 Hb RTA基因的表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]巴西橡胶树橡胶生物合成关键基因REF,SRPP,HRT1和HRT2的表达分析[J]. 王艺航,康桂娟,黎瑜,覃怀德,曾日中.  基因组学与应用生物学. 2018(09)
[2]我国天然橡胶产业发展概况及现状分析[J]. 金华斌,田维敏,史敏晶.  热带农业科学. 2017(05)
[3]巴西橡胶树HbNAC24基因克隆和表达分析[J]. 康桂娟,黎瑜,曾日中.  西北植物学报. 2014(12)
[4]应用酵母双杂交系统筛选橡胶延长因子REF的互作蛋白[J]. 曾日中,李先昆,聂智毅,代龙军,黎瑜,段翠芳.  热带亚热带植物学报. 2011(05)
[5]一种提取橡胶树叶中总DNA的方法[J]. 安泽伟,黄华.  植物生理学通讯. 2005(04)

硕士论文
[1]巴西橡胶树小橡胶粒子蛋白SRPP互作蛋白的研究[D]. 王艺航.海南大学 2018
[2]橡胶树橡胶延伸因子HbREF3的基因克隆与表达研究[D]. 孙丽娜.海南大学 2016



本文编号：3587170