白花泡桐纤维合成酶PfCesA4基因克隆及初步表达分析

发布时间：2023-03-19 06:19

　　本研究的目的是克隆白花泡桐纤维素生物合成途径关键酶基因——纤维素合成酶家族基因。采用PCR和RACE技术,利用Oligo、Primer Premier 5等软件进行引物设计,从白花泡桐中克隆出纤维素合成酶基因一条,NCBI分析后,命名为PfCesA4 (NCBI登录号:MK340936)。PfCesA4基因的cDNA全长为3 735 bp,其开放阅读框(ORF)长度为3 138 bp,能够编码含有1 045个氨基酸的蛋白质,此蛋白质的相对分子质量为119 081.91 u,等电点为7.24。二级结构分析表明其以α-螺旋和无规则卷曲为主。结构域和跨膜区分析表明其在N端含有锌指结构域及2个跨膜区,在C端含有6个跨膜区,这些结构域能够表现纤维素合成酶的特征。系统进化树分析表明在所选取的物种当中,白花泡桐与芝麻的亲缘关系较近。组织特异性分析结果表明,其在茎中的表达量最高,根部次之,叶部最少;且在茎中,木质部的表达量高于韧皮部,说明其可能主要参与次生壁的建成。通过对PfCesA4基因的克隆及分析,能够为泡桐纤维素生物合成途径及后期利用分子手段对泡桐木材进行遗传改良提供基因资源。

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 克隆获得PfCesA4基因中间片段
    1.2 扩增获得白花泡桐PfCesA4基因两端序列
    1.3 白花泡桐PfCesA4基因为一条完整的基因
    1.4 白花泡桐PfCesA4基因生物信息学分析
        1.4.1 白花泡桐Pf CesA4蛋白一级结构、二级结构及其他理化性质分析
        1.4.2 白花泡桐Pf CesA4蛋白结构域及跨膜区分析
        1.4.3 系统发育树聚为两类
    1.5 白花泡桐PfCesA4基因组织特异性表达分析
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 试验材料
    3.2 白花泡桐总RNA的提取及反转录
    3.3 白花泡桐PfCesA4基因中间序列克隆
    3.4 RACE引物设计及cDNA获取
    3.5 利用5'RACE和3'RACE技术扩增PfCesA4基因的两端序列
    3.6 白花泡桐PfCesA4基因开放阅读框的克隆
    3.7 序列及生物信息学分析
    3.8 PfCesA4基因组织特异性表达分析
作者贡献



本文编号：3764734