毛果杨NAC128基因在次生壁形成中的功能

发布时间：2025-03-18 04:06

　　 【目的】克隆并鉴定与毛果杨次生壁形成相关的NAC(NAM,ATAF1/2,CUC2)转录因子,在组织表达特异性分析的基础上,通过过量表达分析转基因植株表型及下游调控网路,解析该基因调控杨树次生壁组分生物合成的作用机制,为利用该基因进行林木种质创新奠定基础。【方法】基于前期转录组数据,克隆到1个在毛果杨茎中高表达的NAC转录因子Ptr NAC128。利用qRT-PCR技术分析Ptr NAC128在毛果杨根、茎、叶中的相对表达量。构建35S∷Ptr NAC128-GFP植物表达载体,利用农杆菌介导法转化毛白杨;利用基因枪法将PtrNAC128-GFP融合蛋白在烟草叶片中进行瞬时表达,而后对PtrNAC128进行亚细胞定位分析;对毛白杨转基因植株和野生型植株的横切面切片染色观察,并通过qRT-PCR检测木质素、纤维素、半纤维素合成途径关键酶基因及调控次生壁各组分生物合成的NAC、MYB转录因子的表达差异,解析过表达Ptr NAC128对杨树次生壁各组分的影响。【结果】毛果杨PtrNAC128与拟南芥ANAC075聚在一支,具有典型NAC结构域和完整的C端激活区。qRT-PCR结果表明Ptr ...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料及试剂
    1.2 毛果杨Ptr NAC128基因的克隆和序列分析
    1.3 Ptr NAC128基因的qRT-PCR分析
    1.4 Ptr NAC128基因植物过表达载体的构建及毛白杨遗传转化
    1.5 亚细胞定位分析
    1.6 毛白杨茎横切面解剖观察
    1.7 次生壁组分含量测定
        1.7.1 木质素含量测定
        1.7.2 纤维素及半纤维素含量测定
    1.8 次生壁组分合成关键酶基因及转录因子的表达分析
2 结果与分析
    2.1 毛果杨Ptr NAC128基因克隆及结构分析
    2.2 Ptr NAC128基因的组织表达分析
    2.3 亚细胞定位分析
    2.4 Ptr NAC128过表达载体的构建与遗传转化
    2.5 转基因毛白杨植株表型分析
    2.6 木质部细胞次生壁中木质素、纤维素、半纤维素含量测定
    2.7 木质部细胞次生壁组分关键合成酶基因及转录因子的表达检测
3 讨论
4 结论



本文编号：4035978