lncRNA AABR07005593.1在PM2.5诱导呼吸系统炎症中的作用机制

发布时间：2024-05-09 03:16

　　目的:本研究旨在探索长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)与广州地区采集的细颗粒物(Fine particulate matter,PM_2.5)诱发大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)和SD大鼠的炎症反应间调控关系。方法:第一部分:采集广州地区的PM_2.5暴露于NR8383细胞诱发炎症建立炎症模型。用CCK8法检测不同染毒时间、染毒浓度下的细胞存活率。细胞因子抗体芯片筛选出主要的炎性因子,RT-q PCR、ELISA进行验证。通过lncRNA高通量测序筛选与RT-q PCR验证出差异显著的lncRNAs。通过胞浆胞核亚细胞定位实验确定lncRNAs在细胞中的分布情况并确定lncRNA AABR07005593.1作为研究的目的lncRNA。使用RNAi技术构建细胞转染lncRNA AABR07005593.1的loss-of-function体系,转染联合PM_2.5暴露染毒,观察炎性因子的表达水平。通过lncRNA高通量测序、目的lncRNA功能实验及KEGG数据库分析,我们预测目的lncR...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 lncRNA AABR07005593.1在PM_2.5诱导NR8383 细胞炎症反应中的作用
    1.材料与方法
        1.1 主要实验材料
        1.2 主要设备
        1.3 颗粒物的采集与处理
        1.4 细胞培养
        1.5 制备PM_2.5工作液
        1.6 细胞存活率的检测
        1.7 细胞因子抗体芯片筛选炎性因子
        1.8 RT-qPCR及 ELISA验证炎性因子的表达水平
        1.9 NR8383 细胞暴露PM_2.5后转录组测序及分析
        1.10 胞浆胞核亚细胞定位实验
        1.11 lncRNAAABR07005593.1 功能验证实验
        1.12 NF-ΚB通路阻断实验
        1.13 ChIRP-MS实验
        1.14 统计学处理
    2 结果
        2.1 PM_2.5对细胞存活率的影响
        2.2 细胞因子抗体芯片筛选炎性因子
        2.3 RT-qPCR及 ELISA验证炎性因子的表达水平
            2.3.1 RT-qPCR验证炎性因子的转录水平
            2.3.2 ELISA验证炎性因子的蛋白水平
        2.4 NR8383 细胞暴露于PM_2.5后转录组测序及分析
        2.5 胞浆胞核亚细胞定位实验
        2.6 lncRNA AABR07005593.1 功能验证实验
        2.7 NF-ΚB通路阻断实验
        2.8 ChIRP-MS实验
    3 讨论
第二部分:PM_2.5诱导SD大鼠产生炎性反应及lncRNA AABR07005593.1的表达情况
    1 材料与方法
        1.1 主要实验材料与设备
        1.2 实验动物
        1.3 PM_2.5颗粒的采集与处理
        1.4 大鼠分组及染毒方式
        1.5 大鼠观察与处理
        1.6 血常规指标检测
        1.7 脏器观察
        1.8 大鼠肺组织细胞因子抗体芯片及RT-qPCR结果
            1.8.1 细胞因子抗体芯片筛选炎性因子
            1.8.2 RT-qPCR验证炎性芯片结果
        1.9 RT-qPCR验证目的lncRNA AABR07005593.1 的表达
        1.10 统计学描述
    2 结果
        2.1 大鼠的一般情况
        2.2 各组大鼠体质量变化
        2.3 各组SD大鼠周围血血常规指标比较结果
        2.5 各组大鼠脏器系数比较
        2.6 各组大鼠肺组织病理学检查结果
        2.7 大鼠肺组织细胞因子抗体芯片及RT-qPCR结果
        2.8 RT-qPCR验证目的lncRNA AABR07005593.1 的表达
    3 讨论
参考文献
附录
综述 大气细颗粒物(PM_2.5)致呼吸系统疾病的作用机制研究进展
    参考文献
致谢
个人简历
攻读学位期间发表的学术论文



本文编号：3968237