决明1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶和1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶的功能鉴定与表达分析

发布时间：2022-10-19 16:34

　　本研究根据决明三代转录组测序获得的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶（CoDXS）和1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶（CoDXR）基因的全长序列设计特异性引物,PCR扩增获得CoDXS、CoDXR基因的OFR,构建原核表达载体pTrc-CoDXS、pTrc-CoDXR在含有质粒PAC-BETA的TOP10重组菌中进行表达,通过TOP10的菌斑颜色变化来验证CoDXS和CoDXR基因的功能。利用实时荧光定量PCR来检测CoDXS、CoDXR基因在决明不同组织中以及六种胁迫条件下的表达情况。研究结果表明CoDXS、CoDXR基因的OFR分别为2 127、1 416 bp,编码的氨基酸数目分别为708、471,功能鉴定结果显示含有CoDXS、CoDXR基因编码区的TOP10菌斑呈现出深橘黄色;CoDXS基因的表达趋势为:花＞茎＞种子＞叶＞根,CoDXR基因的表达趋势为:叶＞花＞茎＞根＞种子。对CoDXR和CoDXS基因在不同的胁迫条件下的相对表达量检测分析发现,在盐胁迫条件下:CoDXS基因的表达量整体呈现出下降趋势,CoDXR基因的表达量波动范围较小;在ABA胁迫条件下:CoDXS... 

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【文章目录】：
1 材料与试剂
    1.1 材料
    1.2 主要试剂
2 方法
    2.1 RNA提取、检测及反转录
    2.1 CoDXS、CoDXR基因的功能鉴定
        2.2.1 引入酶切位点的重组载体pMD19-T-CoDXS、pMD19-T-CoDXR的构建
        2.2.2 pTrc-CoDXS、pTrc-CoDXR重组表达载体的构建
        2.2.3 构建表达菌株
        2.2.4 构建对照菌株
        2.2.5 比较携带有不同质粒的T0P10的生长情况
    2.3 CoDXS、CoDXR基因的qRT-PCR表达分析
3 结果与分析
    3.1 原核表达载体pTrc-CoDXS、pTrc-CoDXR的构建
    3.2 pTrc-CoDXR和pTrc-CoDXS在TOP10中的表达鉴定
    3.3 CoDXS、CoDXR基因在决明不同组织中的表达情况
    3.4 CoDXR、CoDXS基因在不同胁迫条件下的表达情况
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Effects of GA3 and NAA on Fatty Acid Degradation in Germination and Seedling Growth of Cassia obtusifolia L. Seed[J]. Die FU,Shiqiong LUO,Zhannan YANG,Yuanshuai WANG,Haitao YE.  Medicinal Plant. 2020(01)
[2]异戊二烯焦磷酸异构酶的表达及其催化功能验证[J]. 刘敏,刘建忠,冯红茹,杨建明,苏思正,曹玉锦.  武汉科技大学学报. 2013(03)
[3]浅述植物萜类物质的生物合成途径[J]. 陆锦池,陈荣山,刘长辉,叶陈英,王海斌,何海斌.  农业科技通讯. 2009(03)
[4]不同培养条件对大肠杆菌工程菌产β-胡萝卜素的影响[J]. 杜桂彩,刘敏,赵瑜,李荣贵.  食品科学. 2008(07)



本文编号：3693717