北柴胡转录因子BcbZIP179的基因克隆及原核表达

发布时间：2023-03-24 22:32

　　目的克隆北柴胡转录因子基因BcbZIP179的全长编码序列,原核表达融合蛋白。为进一步研究该基因在北柴胡转录调控中的功能提供理论依据。方法以北柴胡转录组数据为基础,设计特异性引物,PCR扩增BcbZIP179基因的全长编码序列,利用生物信息学分析软件分析序列特征。利用qPCR方法分析BcbZIP179基因在不同组织器官中的表达及MeJA处理条件下的表达情况。构建原核表达载体,在不同温度和IPTG浓度下,采用2种菌株诱导表达目的蛋白。结果 BcbZIP179编码序列全长432 bp,编码144个氨基酸,BcbZIP179受MeJA诱导,在MeJA处理的北柴胡不定根中,处理前24 h内,表达量逐渐升高,随后表达量降低;BcbZIP179在北柴胡的根、茎、叶、花及果实中均有表达,在果实中的表达量最高;利用大肠杆菌原核表达系统,在16℃和37℃不同温度条件下均获得了带有6×His标签的BcbZIP179融合蛋白。结论克隆到了北柴胡中的1个bZIP家族的转录因子基因BcbZIP179,在16℃、IPTG 0.05 mmol·L^-1条件下,可获得体外表达的蛋白,为制备抗体、分...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 试剂
    1.3 RNA提取与c DNA合成
    1.4 Bcb ZIP179基因的全长克隆及序列分析
    1.5 Bcb ZIP179基因表达分析
    1.6 原核表达载体构建
    1.7 原核表达条件摸索
2 结果与分析
    2.1 北柴胡Bcb ZIP179的序列分析
    2.2 Bcb ZIP179基因表达分析
        2.2.1 Bcb ZIP179基因在北柴胡不同组织中的表达分析
        2.2.2 Bcb ZIP179基因受Me JA诱导的表达分析
    2.3 Bcb ZIP179原核表达
3 讨论



本文编号：3769976