苹果锈果类病毒实时荧光定量反转录PCR检测及其在苹果树体内的扩散转移规律

发布时间：2024-02-14 00:05

　　为明确苹果锈果类病毒(apple scar skin viroid,ASSVd)在苹果树体内的转移规律,本研究建立高灵敏度的实时荧光定量反转录PCR(real-time fluorescence quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)方法,利用此方法检测该病毒在树体内的转移规律以及苹果果实上病毒积累量与症状的相关性。结果表明,本研究所建立的RT-qPCR检测技术能针对枝皮、果实、根组织中的ASSVd进行准确、灵敏的检测,检测灵敏度下限为41.00 fg/μL(相当于5.95×105copies/μL RNA);在嘎拉苹果树上接种ASSVd,2个月后植株各组织部位病毒积累量均较高,尤其是接种枝先端和树冠下层枝组,根部病毒积累量很少;接种4个月后,各组织部位病毒积累量下降,病毒在植株上部、下部和根部均匀分布;接种6个月后,在接种枝中下部和根部病毒积累量相对较高;接种8个月后,地上部各组织部位病毒积累量很低,主要集中在根部。在花脸症果实着色不同的果皮中ASSVd积累量差异显著,未着色果皮病毒积累量是着色果皮的4～40倍。表明ASSVd自...

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【部分图文】：

图1果树嫁接接种ASSVd的位置及检测部位示意图

在2019年4月初采用芽接方式对多年不显症且经RT-qPCR检测不携带ASSVd的8年生嘎拉苹果树树体中部接种ASSVd，在接种2、4、6和8个月分别在树冠上层主枝枝组（图1-A）、树冠次上层主枝枝组（图1-B）、病毒接种枝接种点近端（图1-C）、病毒接种枝接种点远端（图1-D....

图2ASSVd的RT-qPCR检测体系的标准曲线

对以线性化的质粒为模板体外转录得到的RNA进行梯度稀释，然后反转录，用引物ASSV‐dR2-F/R进行RT-qPCR扩增，扩增曲线中荧光增加值对应的循环数与模板初始浓度基本呈线性关系，去除线性误差较大的点，得到标准曲线方程为y=-2.646x+65.170，相关系数R2=0.....

图3ASSVdRT-qPCR检测体系的特异性测定

为验证体系的特异性，对检测携带ACLSV、ASGV、ASPV的苹果组培苗及携带ASSVd、ApMV、ApNMV和ADFVd的苹果枝皮进行扩增，由扩增的荧光曲线可知只有携带ASSVd的样品才有荧光信号（图3），说明该体系检测ASSVd的特异性高；用健康组织RNA溶液对果皮、须根....

图4三种不同苹果组织部位的ASSVdRT-qPCR检测灵敏度

定量测定ASSVd的增殖和转移情况，结果显示，接种2个月后，植株各组织部位病毒积累量均较高，尤其是接种枝先端和树冠下层枝组，根部病毒积累量最少，为2.5×1013copies/g；接种4个月后，各组织部位病毒积累量与接种2个月后相比病毒积累量有所降低，除了植株冠层最顶端和接种枝先....

本文编号：3897427