猕猴桃溃疡病田间快速检测技术优化

发布时间：2024-05-17 04:56

　　猕猴桃溃疡病是严重危害猕猴桃产业发展的重要细菌性病害,由于致病菌潜伏期不表现病症,常错过最佳的防治时期。为实现猕猴桃溃疡病田间无症带菌状态的早期诊断,本研究对田间快速检测技术进行了优化,并采集田间无症样本进行验证。结果表明,猕猴桃溃疡病病健交界处组织用金氏B培养液浸泡8 h可获得质量较高的PCR模板;在PCR反应体系中加入φ=10%的甘油能显著增强扩增效果;当检测无症带菌样本时,浸提液中加入Na₂SO₃,26℃浸泡8 h有利于降低PCR反应中抑制物的干扰;进一步优化PCR反应中模板DNA的添加量;无症样本检测结果表明,在猕猴桃孕蕾至开花期的新生枝条中溃疡病致病菌的检出率最高,可达91.8%。本试验优化后的PCR特异性分子检测技术,有助于及早发现无症带菌的猕猴桃溃疡病病株,对尽早有针对性实施田间防控具有重要意义。

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【部分图文】：

图1不同样品浸泡液的浸提效果

浸泡液的浸提效果比对结果显示(图1),金氏B浸泡液制备的模板在PCR扩增后呈现的DNA靶带清晰明亮,浸提效果最好,其次分别为样品PDA培养液、LB培养液、磷酸缓冲液,3次重复的结果一致。样品浸泡时间筛选的结果显示(图2),浸泡2h和5h均未检出扩增产物,说明浸泡时间过短;但是....

图2样品不同浸泡时间对比

图1不同样品浸泡液的浸提效果2.2PCR反应中化学增强剂的作用效果

图3化学增强剂对PCR反应的影响

按照文中“1.7”的方法制备溃疡病检测样品模板,通过加入不同模板量,比对PCR扩增检测效果,结果显示当模板量为1μL、1.5μL和2μL时均可扩增出目标靶带,其中模板量为1μL～2μL效果最好;而模板量为2.5μL、3μL及3.5μL时均未扩增出DNA靶带(图....

图4甘油使用体积分数优化

图3化学增强剂对PCR反应的影响2.5PCR检测方法在猕猴桃不同发育期的应用效果

本文编号：3975414