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跟血液感染有关的疾病_血液和淋巴新颖的题目_血液及淋巴系疾病论文

发布时间:2016-07-08 08:16

  本文关键词:血液及淋巴系疾病论文,由笔耕文化传播整理发布。


应用CpG

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【中文摘要】:

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    【中文摘要】研究背景慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)是一种起源于终末期成熟B淋巴细胞的克隆性恶性血液病。其白血病细胞有丝分裂活性低下,加用植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA )培养由于主要刺激T细胞分裂,结果大多为正常核型;加用多克隆B细胞激活剂(polyclonal activator)培养,大约半数CLL可检出克隆性染色体异常。20世纪90年代以来采用多种探针的组合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)使CLL的染色体异常检出率提高至80%。最近几年德国学者将未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotide, CpG-ODN)作为免疫刺激剂用于CLL的细胞遗传学研究,结果明显提高了异常核型的检出率,特别是检出了预后差的各种易位。目的为了证实CpG-ODN刺激法是否能提高我国CLL核型异常检出率,我们对57例CLL患者进行了临床和实验研究。方法抽取患者骨髓或外周血,应用CpG-ODN和白细胞介素-2(interlekin-2, IL-2)共刺激培养其白血病细胞,同时分别应用PHA、美洲商陆(pokeweed mitogen, PWM)和IL-2进行刺激培养,然后采用R显带技术进行核型分析。应用SAS(statistical analysis system)统计学程序对4组异常核型检出率作了比较。应用Cen-12、D13S25(13q14.3)、Rb1(13q14)、ATM(11q22.3)、P53(17p13.1)、MYB(6q23)和IgH重排(14q32)等探针对19例核型正常患者的直接法标本进行组合FISH检测。此外,抽提患者DNA,使用IgVH(immunoglobulin variable heavy chain)基因重排特异性引物进行扩增,以判断该基因是否发生突变及突变位置。利用流式细胞仪检测CD38和ZAP70表达。随访患者并对四组核型异常检出率以及核型和其它各项检测指标之间的联系进行统计学分析。结果(1)四组免疫刺激剂培养CLL细胞的常规细胞遗传学分析(conventional cytogenetics, CC)结果显示:以DSP30+IL-2作为免疫刺激剂培养57例CLL细胞,其中25例(43.85%)患者显示核型异常,平均异常细胞百分比为72.98%,畸变种类共52种;以PHA作为免疫刺激剂培养53例CLL细胞,其中8例(15.09%)患者显示核型异常,平均异常细胞百分比为6.25%;以PWM作为免疫刺激剂培养52例CLL细胞,其中9例(17.31%)患者显示核型异常,平均异常细胞百分比为7.22%;以IL-2作为免疫刺激剂培养40例CLL细胞,其中仅1例(3.13%)患者显示核型异常。运用SAS统计学程序对DSP30+IL-2组和PHA组、PWM组、IL-2组刺激培养CLL细胞后核型异常检出率进行比较,结果显示DSP30+IL-2组核型异常检出率明显高于PHA组、PWM组和IL-2组,P值均<0.0001。DSP30+IL-2组核型异常中数目增加以单纯+12或伴有+12的异常为最多,共9例次;染色体结构重排共40种,其中以易位为最多见,共14例,包括平衡易位11例(78.5%)和不平衡易位3例(21.43%)。在平衡易位中又以14q32重排为最多见,包括t(14;18)(q32;q21)3例,t(14;19)(q32;q13)2例,t(11;14)(q13;q32)和t(11;14)(q23;q32)各1例。其它染色体结构重排还包括倒位、重复、等臂染色体和标记染色体等。染色体部分缺失包括1q-、2p-、3p-、6p-、6q-、9q-、11q-、13q-和15q-等多种类型,其中6q- 3例,11q-和13q-各2例。复杂异常共9例。DSP30+IL-2组检出的异常分别在8例PHA刺激组、9例PWM刺激组和1例IL-2刺激组中得到证实,且阳性细胞大多为1个。(2)19例正常核型的CLL患者采用一组探针进行FISH检测,结果显示三体-12 1例;13q14.3缺失11例;Rb1基因缺失6例且均伴有13q14.3缺失;ATM缺失阴性;P53基因缺失仅1例;MYB缺失阴性;IgH基因重排1例和IgH部分缺失1例。综上所述,该组患者中13例(68.42%)有一种或一种以上FISH异常。(3)21例患者的IgVH基因经扩增、电泳和凝胶成像后18例患者显示235-254bp的单克隆条带。PCR(polymerase chain reaction)产物经纯化、测序和IMGT/V-QUEST工具分析显示18例患者中有10例发生突变(55.55%),8例患者未发生突变(44.44%),平均突变率为5.88%,突变主要发生在VH3、VH1和VH4等区域。10例IgVH突变患者中3例(30%)有核型异常,而8例无IgVH突变患者中6例(75%)有核型异常,且其中3例为复杂异常。但统计学检验差别无显著性(P>0.05)。(4)45例流式细胞仪检测CD38表达的患者中10例(22.22%)为CD38+,35例(77.78%)为CD38-,27例检测ZAP70表达的患者中11例(40.74%)为ZAP70+,其余16例(59.25%)为ZAP70-。26例同时进行CD38和ZAP70的检测,其中5例(19.23%)患者示CD38+ZAP70+,13例(50%)显示CD38-ZAP70-,2例(7.69%)显示CD38+ZAP70-,6例(23.08%)显示CD38-ZAP70+。CD38+的10例中5例(50%)有异常核型,而CD38-的35例中14例(40%)有异常核型。11例ZAP70+患者中4例(36.36%)有异常核型,而ZAP70-的16例中8例(50%)有异常核型。统计学分析未发现CD38、ZAP70表达和核型有联系。结论①CpG-ODN刺激法是一种简易而有效的刺激CLL中期分裂相产生的方法,可明显提高异常核型的检出率;②CpG-ODN刺激CLL白血病细胞能明显提高各种平衡和不平衡易位的检出率;③FISH和常规核型分析是互相补充的,两者结合能为CLL患者提供更全面的遗传学信息。

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