利用CRISPR/Cas9基因敲除技术研究Importin-α7对流感病毒生长特性的影响

发布时间：2021-03-14 18:53

　　流感病毒的跨种传播是一个包含病毒和宿主因子之间大量相互作用的复杂过程。除了转换细胞表面受体结合特异性,禽流感病毒还要克服核膜形成的另一个重要屏障–核输入机制来进入细胞核进行有效转录和复制。本文主要研究人源importin-α7对不同来源、不同亚型流感病毒生长的影响。根据CRISPR/Cas9靶点设计原则分别在人importin-α7功能域第5和第6个外显子设计一对小向导RNA（sgRNAs）并克隆入pX459载体,重组质粒共转染A549细胞,构建A549-importin-α7-KO细胞系;再分别用不同来源（人源、猪源和禽源）、不同亚型的甲型流感病毒与乙型流感病毒感染A549-importin-α7-KO细胞和野生型A549细胞,研究importin-α7对流感病毒生长特性的影响。经测序和Western blotting验证,成功构建A549-importin-α7-KO细胞系;激光共聚焦观察结果显示,importin-α7敲除后vRNPs入核减少;同时Importin-α7敲除后流感病毒的生长均受到抑制,其中importin-α7对人流感病毒A/California/04/2009（... 

【文章来源】：病毒学报. 2017,33(06)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材料与方法
    1质粒、病毒及细胞
    2主要试剂
    3 sgRNA oligo的设计及合成
    4重组质粒pX459-importin-α7-sgRNAs的构建及鉴定
    5细胞转染及importin-α7基因敲除单克隆细胞系的筛选
    6单克隆细胞系测序鉴定
    7 Western blotting检测细胞系中importin-α7蛋白的表达
    8 Importin-α7敲除对PR8-Luc复制的影响
    9 Importin-α7敲除对流感病毒vRNPs入核的影响
    10 Importin-α7敲除对不同来源、不同亚型流感病毒生长的影响
结果
    1 A549-importin-α7-KO细胞系的构建和验证
    2 Importin-α7敲除对PR8-Luc复制的影响
    3 Importin-α7敲除对流感病毒vRNPs入核的影响
    4 Importin-α7敲除对不同来源和不同亚型流感病毒生长的影响
讨论



本文编号：3082758