TRIM21促进HBV DNA聚合酶的泛素化并抑制HBV复制

发布时间：2021-03-21 04:52

　　目的:乙肝病毒（hepatitis B virus,HBV）感染是全世界的重大健康问题,可引起慢性肝炎、肝硬化、肝纤维化等严重的肝脏疾病,并是肝细胞癌的重要危险因素,据报道HBV在病毒相关的肝细胞癌中约占80%。HBV是一种小的有包膜的嗜肝DNA病毒,基因组为部分双链、松弛闭合的环状DNA,但其复制过程中有RNA逆转录病毒的特性,其编码的HBV DNA聚合酶（HBV DNA Pol）具有逆转录酶活性,能够识别并结合HBV前基因组RNA（pgRNA）的ε元件启动HBV基因组的复制,并与pgRNA形成复合体包装进入核衣壳,催化pgRNA逆转录为DNA;同时具有DNA聚合酶活性,完成HBV DNA双链的形成,在HBV复制中发挥重要作用。因此对于HBV DNA Pol的调控研究有助于深入了解HBV复制过程。三重基序蛋白（Tripartite motif protein,TRIM）家族具有三个保守的结构域（RING环、B-box盒和卷曲螺旋结构域）,此外还有一个可变的C末端。该家族成员参与细胞分化、增殖、发育、凋亡等多种生物学过程,近年来的研究表明一些TRIM蛋白具有抗病毒的功能,特别是对逆转录... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HBVDNAPol相互作用蛋白的筛选

IM21 的内源性相互作用（图 1-2A）及外源性相互作用（图1-2B）。此外我们用 HA 抗体免疫沉淀细胞内的 TRIM21 及其相互作用蛋白，用Flag 抗体可检测到 HBV DNA Pol 的表达（图 1-2C），进一步验证了两者之间的

图 1-3：HBV DNAPol 与 TRIM21 在 Huh7 细胞中的共定位。用 Flag 融合的 HBV DNAPol 和 HA 融合的 TRIM21 表达质粒瞬时转染 Huh7 细胞，3h 后进行免疫荧光实验分析，用鼠抗 Flag 单克隆抗体及兔抗 HA 多克隆抗体作为探针，并用 FITC 标记的抗兔二抗和 TRITC 标记的抗鼠二抗对细胞进行染色，DAPI 染料用于细胞核的染色，共聚焦显微镜图像采集并分析。比例尺为 20 μm。1.3 小结1. 我们采用免疫共沉淀结合银染及质谱分析确定 HBV DNA Pol 的相互作用蛋白，并选取 TRIM21 作为本课题的研究对象。2. 免疫共沉淀实验证实了 HBV DNA Pol 与 TRIM21 之间的相互作用。3. 免疫荧光结合共聚焦显微镜图像采集技术证实了 HBV DNA Pol 与 TRIM2在细胞质中的共定位。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Hepatitis B virus replication[J]. Juergen Beck,Michael Nassal.  World Journal of Gastroenterology. 2007(01)



本文编号：3092360