人/猴嵌合免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体抗原表位的鉴定
发布时间：2021-03-25 22:56
人/猴嵌合免疫缺陷病毒（simian/human/immunodeficiency virus,SHIV）,是通过基因重组技术,用HIV-1（hunman immunodeficiency viruses -1）的囊膜蛋白基因（env）和部分辅助基因与SIV（simian immunodeficiency viruses）相应基因进行置换,获得的嵌合型病毒。SHIV具有亲本HIV-1和SIV毒株相似的生物学特性,可以在非人灵长类（NHP）动物上模拟HIV-1感染,为研究HIV-1致病机制及疫苗开发提供了重要的模型。SHIV的衣壳蛋白p27构成病毒粒子双层壳的内壳,而且与同属病毒的衣壳蛋白具有相同或相似的抗原性,故可作为SHIV抗原检测的标志物。利用p27抗原和及其抗体,可以在细胞和机体水平对SHIV感染NHP模型进行研究,为艾滋病疫苗研发、免疫策略的有效性以及相关基础研究进行评价。因此,鉴定p27抗原表位对于进一步研究其蛋白结构与功能、开发早期诊断试剂具有重要意义。本研究用Protein A Sepharose CL-4B柱子对前期工作中已制备的3株p27蛋白单克隆抗体（monoclo...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HIV病毒颗粒的结构模型
1.2.1 HIV 的生物学特性及形态结构HIV属于动物逆转录病毒的慢病毒家族成员(Abbus AK et al.,2004)，能够在细胞内长期潜伏感染，引起短暂的细胞病变效应，而且病毒可以造成慢性进行性和致死性的疾病，包括消耗性的综合征及中枢神经系统的退化。HIV包括两种密切相关的类型，命名为HIV-1和HIV-2，绝大多数AIDS是由HIV-1引起的，而HIV-2的基因结构与抗原性均HIV-1不同，引起类似的临床综合征，而且仅在西非流行。HIV-1和HIV-2病毒颗粒的形态完全相同，病毒颗粒直径为100~120nm（如图1-1所示），具有一不定型结构。感染性病毒具有包膜蛋白及3个结构Gag蛋白，包膜蛋白外膜为脂双层膜，来自宿主细胞的细胞膜，膜中嵌有病毒表面糖蛋白（surface envelope protein,SU）gp120和跨膜糖蛋白（transmembrane envelope protein,TM）gp41，外膜内紧贴着基质蛋白（matrix protein,MA）p17。3个结构Gag蛋白包括：基质蛋白（MA，p17）、衣壳蛋白（CA，p24）和核衣壳蛋白（NC，p7）(Gomez et al., 2005)，MA在病毒颗粒包膜内侧形成一个内壳；CA形成包裹病毒RNA基因组的圆锥形核心；NC与衣壳内病毒RNA相连。这些病毒蛋白由病毒蛋白酶水解HIV-1前体蛋白p55而成（图1-2）。Gag蛋白在p55前提蛋白的定位依次为：p17/p24/p2/p7/p1/p6。未被裂解的Gag P55有三个功能区：膜定位区（M）、作用区（I）和晚期（L）。M位于基质蛋白内，经豆蔻酰化后引导Gag蛋白靶向细胞质膜。I存在于核衣壳内，主要介导Gag单体间相互作用。L也存在于核衣壳内，和Gag多聚蛋白P6区一期介导逆转录病毒的出芽(Freed 2002)。
表达载体 pET-32a（+）（图2-1），质粒 pSIVmac239 均由同实验室保存。图 2-1 表达载体 pET-32a (+)读码框架及主要特征图谱Fig.2-1 Map of the plasmid pET-32a (+) showing the reading frames and main features2.2 主要酶类及生化试剂DL15 000 DNA Marker、dNTPs、DL2000 DNA Marker 购于 TaKaRa（大连）公司；Taq聚合酶购于 Prom
【参考文献】：
期刊论文
[1]HIV/AIDS致病机理研究进展[J]. 石艳春,梁浩,郑源强. 内蒙古医学杂志. 2005(10)
[2]中国艾滋病流行与防治对策[J]. 殷大奎. 中国性病艾滋病防治. 1998(04)
[3]全球及世界主要国家HIV/AIDS现况[J]. 孙新华. 中国性病艾滋病防治. 1998(04)
[4]几种部分纯化单克隆抗体方法的比较[J]. 陈伯权,吴美芙,叶群瑞. 病毒学报. 1990(02)
本文编号：3100466
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HIV病毒颗粒的结构模型
1.2.1 HIV 的生物学特性及形态结构HIV属于动物逆转录病毒的慢病毒家族成员(Abbus AK et al.,2004)，能够在细胞内长期潜伏感染，引起短暂的细胞病变效应，而且病毒可以造成慢性进行性和致死性的疾病，包括消耗性的综合征及中枢神经系统的退化。HIV包括两种密切相关的类型，命名为HIV-1和HIV-2，绝大多数AIDS是由HIV-1引起的，而HIV-2的基因结构与抗原性均HIV-1不同，引起类似的临床综合征，而且仅在西非流行。HIV-1和HIV-2病毒颗粒的形态完全相同，病毒颗粒直径为100~120nm（如图1-1所示），具有一不定型结构。感染性病毒具有包膜蛋白及3个结构Gag蛋白，包膜蛋白外膜为脂双层膜，来自宿主细胞的细胞膜，膜中嵌有病毒表面糖蛋白（surface envelope protein,SU）gp120和跨膜糖蛋白（transmembrane envelope protein,TM）gp41，外膜内紧贴着基质蛋白（matrix protein,MA）p17。3个结构Gag蛋白包括：基质蛋白（MA，p17）、衣壳蛋白（CA，p24）和核衣壳蛋白（NC，p7）(Gomez et al., 2005)，MA在病毒颗粒包膜内侧形成一个内壳；CA形成包裹病毒RNA基因组的圆锥形核心；NC与衣壳内病毒RNA相连。这些病毒蛋白由病毒蛋白酶水解HIV-1前体蛋白p55而成（图1-2）。Gag蛋白在p55前提蛋白的定位依次为：p17/p24/p2/p7/p1/p6。未被裂解的Gag P55有三个功能区：膜定位区（M）、作用区（I）和晚期（L）。M位于基质蛋白内，经豆蔻酰化后引导Gag蛋白靶向细胞质膜。I存在于核衣壳内，主要介导Gag单体间相互作用。L也存在于核衣壳内，和Gag多聚蛋白P6区一期介导逆转录病毒的出芽(Freed 2002)。
表达载体 pET-32a（+）（图2-1），质粒 pSIVmac239 均由同实验室保存。图 2-1 表达载体 pET-32a (+)读码框架及主要特征图谱Fig.2-1 Map of the plasmid pET-32a (+) showing the reading frames and main features2.2 主要酶类及生化试剂DL15 000 DNA Marker、dNTPs、DL2000 DNA Marker 购于 TaKaRa（大连）公司；Taq聚合酶购于 Prom
【参考文献】：
期刊论文
[1]HIV/AIDS致病机理研究进展[J]. 石艳春,梁浩,郑源强. 内蒙古医学杂志. 2005(10)
[2]中国艾滋病流行与防治对策[J]. 殷大奎. 中国性病艾滋病防治. 1998(04)
[3]全球及世界主要国家HIV/AIDS现况[J]. 孙新华. 中国性病艾滋病防治. 1998(04)
[4]几种部分纯化单克隆抗体方法的比较[J]. 陈伯权,吴美芙,叶群瑞. 病毒学报. 1990(02)
本文编号：3100466
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