CpG偶联的HCV-E1E2糖基化突变体DNA疫苗及中和性单抗的筛选及验证

发布时间：2021-04-12 21:28

　　丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus, HCV）是黄病毒家族的肝炎病毒属,是具有包膜糖蛋白的单股正链RNA病毒,感染人肝脏后主要引起慢性感染。全球约有1.7亿人口感染HCV,70%的急性感染患者进展为慢性感染,并常进一步发展为肝纤维化和肝癌。HCV共有6-7个基因型,其中基因型1,2,3在世界范围内流行,基因型4主要在埃及,基因型5主要在南非,基因型6主要在东南亚,我国流行的HCV主要是1b型和2型。HCV的传播主要通过非肠道途径,据WHO统计,仅通过不安全的注射途径导致的HCV新增感染每年约有2百万人。迄今为止,HCV尚无有效的疫苗,其治疗主要是聚乙二醇化干扰素联合利巴韦林的给药方案。该治疗方法价格昂贵,其治疗效果与HCV的基因型有一定相关性,并有一定副作用。因此研发新型的HCV疫苗对于HCV的治疗及预防十分迫切和必要。E1和E2包膜糖蛋白对于HCV的进入和感染有重要作用,其存在的丰富N-糖链能调节抗原性和免疫原性。本研究内容主要是通过采用PCR的方法扩增HCV1a型E1E2的基因,用定点突变PCR手段将E1E2基因上特定的N-糖基化位点突变,同时在E1E2的N端和C端同... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

兔抗E2的多克隆抗体的效价检测10^/mlE2原核蛋白包被ELISA板，免疫前与免疫后的兔E2抗血清按照1:51200到1:400

1E2 N-g!ycosylalion mutants.nts amino acid position,屯represents N-glycans. N-glycan was reith Asp (D) at A^-glycosylation sites (N-X-T/S).化突变体在HeLa细胞，HepG2细胞和293T细胞中均2-M质粒用lipofetamine 2000分别转染HeLa细胞，进行La细胞48小时后，将细胞用4%多聚甲醒固定后，用细胞中EIE2及其突变株的表达，PI染细胞核。结果1E2-M在HeLa细胞中均有表达，而在pVAX-1空载转2的表达，如图5A所示。ElE2-WT和CpG-ElE2-M4的质粒瞬时转染HepG2细2野生型和突变体糖蛋白与ER的共定位情况，结果进N430位糖基化缺失后，不影响糖蛋白的表达以及与内)。A"■( PI Merer Mil PI Mtrcr

图6. Western Blot检测各糖基化突变体在293T细胞中的表达将E1E2-WT以及EIE2-M糖基化突变体的表达质粒转染293T细胞，48小时后收获细胞，获取细胞裂解液，取20 i^g的总蛋白进行Western Blot检测。Fig.6 Expression of E1E2 N-glycosylation mutants in 293T cells by Western Blot.EIE2-WT and ElE2-M plasmids were transfected into 293T cell. After 48 hours, the cells were


本文编号：3134012