鞘氨醇激酶-1对热联合内毒素打击小鼠肺微血管内皮细胞通透性的影响

发布时间：2021-04-22 00:25

　　目的探讨鞘氨醇激酶-1（SphK1）对热联合内毒素（LPS）打击小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）通透性的影响。方法分离培养并鉴定PMVECs,建立热联合LPS双重打击PMVECs模型。将PMVECs细胞分为对照组、热打击组（HS组）、内毒素打击组（LPS组）及热联合内毒素打击组（HS+LPS组）,采用Westernblotting检测各组细胞2种鞘氨醇激酶亚型（SphK1/2）、3种1-磷酸鞘氨醇膜受体（S1PR1/2/3）,以及相关紧密连接蛋白如闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白1（ZO-1）的表达,荧光定量PCR检测SphK及S1PRmRNA的表达。将细胞分为对照组、HS+LPS组及DMS预处理热联合内毒素打击组（HS+LPS+DMS组）,采用SphK活性检测试剂盒检测酶活性,CCK-8试剂盒检测细胞活力,EVOM跨膜电阻测量仪检测细胞跨上皮电阻（TEER）,并观察特异性抑制SphK1表达对细胞活力和通透性的影响。结果热联合内毒素打击后,细胞SphK1和S1PR3蛋白、mRNA表达及酶活性水平与正常对照组比较明显上升（P<0.01）,细胞活力、TEER值、紧密连接... 

【文章来源】：解放军医学杂志. 2019,44(12)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料及试剂
    1.2 小鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs）的分离培养及鉴定
    1.3 细胞分组及处理
    1.4 SphK1/2、S1PR1/2/3蛋白表达水平检测
    1.5 SphK1/2、S1PR1/2/3 mRNA表达水平检测
    1.6 SphK1/2酶活性检测
    1.7 Sphk1特异性抑制剂DMS预处理对PMVECs细胞通透性损伤的保护作用
    1.8 C C K-8法检测细胞活力
    1.9 跨上皮电阻（transepithelial electrical resistance,TEER）及紧密连接蛋白1（zonula occludens-1,ZO-1）、闭合蛋白（occludin）表达水平测定
    1.1 0 统计学处理
2 结果
    2.1 PMVECs的培养及鉴定
    2.2 热联合内毒素打击对PMVECs SphK mRNA、蛋白表达及酶活性的影响
    2.3 热联合内毒素打击对PMVECs S1PR m R NA和蛋白表达的影响
    2.4 D M S预处理对P M V E C s活力及通透性的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]热打击对培养人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响[J]. 耿焱,彭娜,刘亚楠,付炜,雷玉梅,苏磊.  感染、炎症、修复. 2013 (01)
[2]脓毒症血管内皮细胞损伤与微循环功能障碍[J]. 章志丹,马晓春.  中国危重病急救医学. 2011 (02)
[3]重症中暑住院病人流行病学调查与分析[J]. 苏磊,郭振辉,钱洪津.  解放军医学杂志. 2006(09)



本文编号：3152792