基于LC-MS/MS技术的克罗恩病模型大鼠的靶标定量代谢组学研究

发布时间：2021-11-07 01:06

　　目的：本课题旨在利用高效液相色谱质谱联用技术建立两个定量代谢组学方法,研究克罗思病（Crohn’s disease, CD）大鼠模型中代谢物组成的时间分布规律,从而找出差异代谢物,全面系统探讨2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的克罗恩病模型对大鼠肠道菌群和机体的影响。方法：1.建立同时测定芳香族氨基酸及其肠道菌群-宿主共代谢物的LC-MS/MS方法建立同时测定大鼠血浆、尿液样品中3种芳香族氨基酸（AAA）苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）及4个肠道菌群宿主共代谢物吲哚（Indole, I）、对甲酚（p-Cresol, PC）、硫酸吲哚（Indoxyl sulfate, ILS）和硫酸对甲酚（p-Cresyl sulfate, PCS）的LC-MS/MS方法。优化色谱、质谱条件,对方法的线性范围、精密度、准确度和稳定性进行考察。2.建立同时测定氨基酸、单胺类神经递质和嘌呤嘧啶的亲水色谱串联质谱（HILIC-MS/MS）方法在前期建立利用HILIC-MS/MS测定血清中、脑中24种氨基酸、4种神经递质和8中嘌呤嘧啶含量的方法,建立测定尿样中32中氨基酸、神经递质和... 

【文章来源】：广州中医药大学广东省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 综述
    1.1 代谢组学
        1.1.1 非定量代谢组学与定量代谢组学
        1.1.2 研究方法
    1.2 克罗恩病
        1.2.1 克罗恩病发病机制
        1.2.2 克罗恩病模型
    1.3 内源性代谢物
        1.3.1 肠道菌群宿主共代谢物
        1.3.2 氨基酸、单胺类神经递质及嘌呤嘧啶
            1.3.2.1 HILIC技术
第二章 建立同时测定芳香族氨基酸及其肠道菌群宿主共代谢物的LC-MS/MS方法
    2.1 前言
    2.2 仪器与材料
        2.2.1 仪器
        2.2.2 对照品和试剂
    2.3 方法
        2.3.1 对照品溶液的配制
        2.3.2 样品处理方法
        2.3.3 色谱和质谱条件
        2.3.4 方法学验证
            2.3.4.1 线性
            2.3.4.2 精密度、准确度及提取回收率考察
            2.3.4.3 稳定性
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 质谱条件优化
        2.4.2 色谱条件优化
        2.4.3 样品处理方法
        2.4.4 方法学验证结果
            2.4.3.1 线性
            2.4.3.2 精密度、准确度与提取回收率
            2.4.3.3 稳定性
    2.5 本章小结
第三章 建立同时测定氨基酸、单胺类神经递质和嘌呤嘧啶的HILIC-MS/MS方法
    3.1 前言
    3.2 仪器与材料
        3.2.1 仪器
        3.2.2 对照品和试剂
    3.3 方法
        3.3.1 对照品溶液和内标溶液的配制
        3.3.2 样品处理方法
        3.3.3 色谱和质谱条件
        3.3.4 方法学验证
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 方法的建立
        3.4.2 方法学验证结果
    3.5 本章小结
第四章 CD大鼠血浆、尿样中芳香类氨基酸及其共代谢物的靶标代谢组学研究
    4.1 前言
    4.2 仪器与材料
        4.2.1 仪器
        4.2.2 对照品和试剂
        4.2.3 动物
    4.3 方法
        4.3.1 动物实验
        4.3.2 样品处理与测定
        4.3.3 数据处理
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 CD模型复制评价
        4.4.2 多变量统计分析结果
        4.4.3 代谢差异物识别
        4.4.4 差异代谢物生物学意义解析
    4.5 本章小结
第五章 CD大鼠血清、尿样中31种氨基酸和嘌呤嘧啶的靶标代谢组学研究
    5.1 前言
    5.2 仪器与材料
        5.2.1 仪器
        5.2.2 对照品和试剂
        5.2.3 动物
    5.3 方法
        5.3.1 动物实验
        5.3.2 样品处理与测定
        5.3.3 数据处理
    5.4 结果与讨论
        5.4.1 多变量统计分析结果
        5.4.2 代谢差异物识别
        5.4.3 差异代谢物生物学意义解析
    5.5 本章小结
结语
参考文献
在校期间发表论文情况
致谢
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]肠道正常菌群与肠道免疫[J]. 徐凯进,李兰娟.  国外医学.流行病学传染病学分册. 2005(03)
[2]提高生物大分子NMR分辨率和灵敏度的有效方法:TROSY和CRINEPT[J]. 周志明,刘买利,张许,叶朝辉.  波谱学杂志. 2004(03)

博士论文
[1]基于液质联用技术的代谢组学新方法的研究与应用[D]. 夏建飞.华东理工大学 2010



本文编号：3480866