日本脑炎病毒通过内质网IRE1/JNK信号通路诱导BHK-21细胞凋亡

发布时间：2021-11-07 23:08

　　乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）属于黄病毒科黄病毒属（Flavivirus）,其基因组为11kb左右的单股正链RNA。乙型脑炎的治疗没有特殊的有效方法,因此,在分子水平上阐明JEV的致病机制,进而开发特殊有效的乙型脑炎治疗药物,是近年来国内外乙JEV研究的热点和前沿。内质网是真核细胞中一种重要的亚细胞器。内质网内蛋白质未完全折叠或折叠错误等内质网压力能引起从内质网到胞浆和胞核的信号传导途径即内质网应激反应。减轻内质网压力、利于细胞生存的内质网应激反应包含非折叠蛋白质反应（unfolded protein response,UPR）。当内质网内的非折叠或错误折叠蛋白积累时,分子伴侣GRP78（glucose-regulated protein 78,也称Bi P）与内质网的三种跨膜蛋白ATF6（activating transcription factor 6）、IRE1（inositol-requiringenzyme 1）和PERK（PER-like ER kinase）解离,进而激活UPR的三条信号通路（ATF6,IRE1和PERK信号... 

【文章来源】：江西农业大学江西省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstrct
英文缩略词表
第一章 绪论
    1.1 日本脑炎病毒
        1.1.1 世界乙型脑炎流行情况
        1.1.2 我国乙型脑炎流行情况
        1.1.3 JEV传播途径
        1.1.4 JEV的感染与发病
        1.1.5 JEV基因组
        1.1.6 JEV分型
        1.1.7 JEV的生命周期
    1.2 哺乳动物非折叠蛋白反应研究进展
        1.2.1 折叠循环、质量控制、ER相关的降解（ERAD）
        1.2.2 PERK通路
        1.2.3 ATF6途径
        1.2.4 IRE1通路
    1.3 ER导致的自噬和凋亡
第二章 JEV诱导内质网应激反应及细胞凋亡
    2.1 前言
    2.2 试验材料
        2.2.1 细胞系材料
        2.2.2 病毒株材料
        2.2.3 试剂
    2.3 试验方法
        2.3.1 细胞培养和病毒扩增、滴度测定
        2.3.2 病毒、药物处理细胞试验
        2.3.3 RT-PCR
        2.3.4 Western blot
        2.3.5 细胞增殖与细胞毒检测（MTT法）
    2.4 试验结果
        2.4.1 乙脑病毒感染诱导GRP78，ATF4转录水平升高。
        2.4.2 乙脑病毒感染诱导XBP1 mRNA拼接
        2.4.3 乙脑病毒感染诱导GRP78， chop蛋白水平升高和ATF6剪切
        2.4.4 乙脑病毒感染和内质网应激反应激活诱导BHK-21细胞病变和活力降低
    2.5 讨论
第三章 RNA-seq技术研究JEV引起的细胞内基因表达水平变化
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 细胞系材料
        3.2.2 病毒株材料
        3.2.3 试剂：
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养等
        3.3.2 病毒、药物处理细胞试验
        3.3.3 RNA提取
        3.3.4 送样测序
    3.4 实验结果
        3.4.1 RNA样品质量满足建库测序要求
        3.4.2 得到可靠测序数据
        3.4.3 比对参考基因组
        3.4.4 各组基因表达水平差异
        3.4.5 差异基因表达分析
    3.5 讨论
第四章 JEV通过内质网IRE1/JNK信号通路诱导细胞凋亡
    4.1 前言
    4.2 实验材料
        4.2.1 细胞系材料
        4.2.2 病毒株材料
        4.2.3 试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 细胞培养
        4.3.2 细胞的处理
        4.3.3 细胞增殖与细胞毒检测（MTT法）
        4.3.4 细胞流式实验
        4.3.5 western blot实验
        4.3.6 磷酸化western blot实验
        4.3.7 RT-PCR
        4.3.8 TCID50
        4.3.9 统计分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 IRE1抑制剂、JNK激酶抑制剂处理接毒后的细胞能显著减少细胞凋亡的发生
        4.4.2 IRE1抑制剂处理使接毒细胞内CHOP、caspsase 3 和磷酸化IRE1蛋白水平下降
        4.4.3 药物处理对JEV复制没有影响
    4.5 讨论
在校期间完成的其他工作
参考文献
致谢
在校期间论文发表情况



本文编号：3482561