一个新克隆的microRNA调节破骨细胞分化的作用及机制研究

发布时间：2021-11-09 01:31

　　第一部分一个新microRNA的克隆及其在破骨细胞分化过程中作用的研究目的：筛选新的小鼠破骨细胞特异性表达或优势表达的microRNA,研究其在小鼠体内不同组织和细胞的表达谱及在破骨细胞分化过程中的作用。方法：将小鼠原代成骨细胞与骨髓细胞共同培养获得原代破骨细胞,分离并克隆细胞内所有小RNA,并与已知的小RNA进行比对鉴定了一个新的microRNA,提交miRBase数据库注册后命名为miR-9718;应用Northern Blot测定小鼠不同组织及细胞miR-9718的表达情况；用M-CSF联合RANKL诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,用Northern Blot及qRT-PCR测定miR-9718在RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程中的表达模式；用pSilencer4.1-CMV载体构建miR-9718表达载体pre-miR-9718,并转染RAW264.7细胞,建立miR-9718过表达细胞模型,加入RANKL及M-CSF诱导其向破骨细胞分化,提取细胞总RNA用qRT-PCR法测定破骨细胞特异性标记物TRAP及NFATc1的mRNA表达水平,并行TRAP染色观察破骨细... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

miR-9718在小鼠不同组织和细胞中的表达谱

图3 miR-9718在RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程中的表达模式注：左图为用NorthemBlot检测miR-9718表达，同一张膜经洗脱后检测内参U6表达。右图为qRT-PCR检测niiR-9718表达，用其与IJ6表达量的比值表示。

0 i2h 24h 48h图3 miR-9718在RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程中的表达模式左图为用NorthemBlot检测miR-9718表达，同一张膜经洗脱后检测内参U6表达。右图为qRT-PCR检测niiR-9718表达，用其与IJ6表达量的比值表示。表达miR-9718对RA\V264.7细胞向破骨细胞分化的影响pre-miR-9718转染后iniR-9718表达水平的变化为了研究miR-9718在破骨细胞分化过程中的作用，我们构建了 miR-9718达载体(pre-niiR-9718)，并将其稳定转染RAW264.7细胞，提取细胞总RNAorthern Blot检测转染前后miR-9718表达水平，以U6作为内对照。之前的已经证实在转染前，RAW264.7细胞中无miR-9718表达。结果显示与转染-C空载体的对照组相比，pre-miR-9718转染后的RAW264.7细胞中miR-9718明显升高（图4),证实pre-miR-9718载体构建成功，且转染pre-miR-9718RAW264.7细胞可以稳定地过表达miR-9718。CO

【参考文献】：
期刊论文
[1]One Decade of Development and Evolution of MicroRNA Target Prediction Algorithms[J]. Paula H.Reyes～Herrera,Elisa Ficarra.  Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2012(05)



本文编号：3484384