LRG47/EBP50基因共修饰的耻垢分支杆菌治疗性靶向载体疫苗的实验研究

发布时间：2021-11-29 00:27

　　研究目的：构建LRG47/EBP50和LRG47/EBP50-RFP基因共修饰的耻垢分枝杆菌治疗性载体疫苗,使之能靶向进入MΦ,以便于后续从分子和细胞水平研究其抗Mtb感染的效果和机制。有望克服潜伏感染、多重耐药和再燃等结核病治疗难题,为开辟一条结核病防治的新思路奠定理论基础。研究策略与方法：1.利用RT-PCR从小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中扩增出EBP50基因、LRG47基因分别克隆至pCDNA3.1中,送去测序。测序正确后,通过次序严密的分步克隆,将EBP50基因片段亚克隆入双启动子真核共表达质粒pBudCE4.1的HindⅢ/BaMHl位点中、将LRG47基因亚克隆入pBudCE4.1的KpnlⅠ/Xhol位点中、分枝杆菌复制子OriM基因亚克隆入pBudCE4.1的NheI位点中,形成穿梭/共表达质粒pLEM并转染人293T细胞中进行表达鉴定。通过RT-PCR和Westernblot对目标基因产物进行检测。2.利用PCR从pSIREN-DNA-DsRed-Express中扩增出RFP基因并克隆至pCDNA3.1的EcoRⅠ/Xba I位点中,形成pCDNA3.1-RFP... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

提取总RNA凝胶电泳分析

pcDNA3.1一EBPS

pcDNA3.1一EBPS

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3525461