甘露六糖修饰布鲁氏菌P39蛋白作用巨噬细胞和树突状细胞的研究

发布时间：2021-12-29 12:41

　　目的:布鲁氏菌病（简称布病）是具有世界分布性的一类人畜共患传染病,全世界每年新增感染人数大约为50万人。在全世界报告有人畜疫情的国家有170多个。然而,目前的布鲁氏菌疫苗多为弱毒疫苗,存在一定的毒力。随着研究的不断深入,至今已知的布鲁氏菌蛋白中优势抗原蛋白主要包括外膜蛋白（OMPs）、核蛋白L7/L12、表面蛋白（BCSP）、胞质结合蛋白（P39）等。P39蛋白是其中较好的T细胞抗原,是公认的布鲁氏菌优势抗原,但是其免疫保护不足。研究发现,糖基化可以提高蛋白免疫原性。本实验以期通过甘露六糖修饰P39蛋白,研究糖修饰对蛋白免疫原性的影响,为布鲁氏菌糖修饰蛋白抗原疫苗的研究提供理论基础。方法:本实验以布鲁氏菌P39蛋白为研究对象,设计引物并利用PCR法扩增获得P39基因片段,将目的基因连接至表达载体,构建重组质粒后IPTG诱导表达重组蛋白,利用GST层析柱对目的蛋白P39进行纯化。EDC/NHS化学偶联法对该蛋白进行甘露六糖修饰,并检测其糖与蛋白修饰比。然后利用MTT法、间接ELISA法对甘露六糖修饰蛋白免疫小鼠后进行细胞增殖、细胞因子检测、抗体水平检测等实验。此外,利用上述方法研究该糖修... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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.2 重组克隆载体的验证将 P39 目的基因片段与 pMD-19T 载体连接后，转入 E.coli DH5α 感受态细胞。提取质质粒为模板进行 PCR 验证得到阳性克隆菌株，片段大小为 1206 bp(图 1.2)。提取质粒并用 BamH I 和 Xho I 双酶切，得到了载体与目的基因片段，成功获取目的基，片段大小为 1206 bp。(图 1.3)

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【参考文献】：
期刊论文
[1]抗布鲁菌感染免疫防御机制及相关保护性抗原研究进展[J]. 张佩君,刘慧,李延华,赵玄多,陈德坤.  动物医学进展. 2014(02)
[2]Toll样受体在免疫应答中的作用[J]. 褚万立.  医学综述. 2006(15)

硕士论文
[1]牛布鲁氏菌抗原蛋白的克隆表达及其刺激能力的评价[D]. 杜强.扬州大学 2015
[2]羊布鲁氏菌病疫苗免疫后抗体消长规律研究及4种抗体检测方法的比较[D]. 高越.内蒙古农业大学 2013



本文编号：3556147