热带念珠菌KRE9的重组表达及其与抗菌肽CGA-N12相互作用研究
发布时间：2022-02-15 09:11
抗菌肽CGA-N12具有特异抗热带念珠菌（Candida tropicalis MYA-3404）抗性,能够与合成热带念珠菌细胞壁β-1,6-葡聚糖的KRE9蛋白结合。因此,研究抗菌肽CGA-N12与KRE9蛋白之间的相互作用,对揭示抗菌肽CGA-N12在热带念珠菌上的作用靶点具有重要意义。首先,本研究构建了重组载体pET28a-KRE9,在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot分析,纯化得到分子量为35 kDa的融合蛋白KRE9。通过测定单位时间内葡萄糖的消耗量,得知融合蛋白KRE9有较高的酶活性。采用等温滴定量热法（ITC）检测抗菌肽CGA-N12与KRE9蛋白的相互作用,结果表明:相互作用过程为吸热反应;抗菌肽CGA-N12与KRE9之间的作用力主要是疏水作用力;结合位点在抗菌肽CGA-N12与KRE9比为6时达到饱和;N值在l左右,表明抗菌肽CGA-N12与KRE9结合为单个位点的结合模型;结合常数Ka值为14892291,表明有较强的相互作用力。为了研究抗菌肽CGA-N12与KRE9蛋白相互作用时的距离,本研究...
【文章来源】：河南工业大学河南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
KRE9的空间结构图
http://www.ch.embnet.org/software/TMPRED_form.html 网站对 K蛋白具有 2 个可能的跨膜螺旋区（图 2）。因此抗菌肽 CGA-N12细胞内部。图 1 KRE9 的空间结构图Fig. 1 The structure of protein KRE9
图 3 ITC 模式图Fig. 3 Model of ITCITC 技术自二十多年前被提出后，最初由 Ernesto Freire 及其同事将该技术引入作用的研究领域[74]。人们通过 ITC 直接测量在恒定温度下发生的反应，以及反相关的能量变化。上世纪 ITC 主要应用于酶催化反应[75-77]，配体结合大分子分子构象变化[82]的热力学特征。大量研究证明该技术可对从简单到复杂相互作学参数进行测定。随着 ITC 技术的广泛应用，特别是 2010 年以来，伴随自动使用，软件系统的改进，其技术手段越来越成熟。在 PubMed 索引的视频期刊（Jo也已经收录了 ITC 方法[83-85]。目前基于 ITC 技术的最新研究进展包括结合相互动力学和热力学信息的 KinITC[86]，以及高亲和力结合反应的 ITC 位移分析[87, ，ITC 技术为研究蛋白质-蛋白质相互作用过程中结合自由能的大小提供了简单ITC 可以直接测量生物分子结合过程中的热量变化，被广泛应用于生物分子相热力学和动力学研究中[89]。此方法灵敏度高、重现性好，还具有原位在线无损
【参考文献】：
期刊论文
[1]少孢节丛孢菌胞外几丁质酶AO-379基因克隆及其表达分析[J]. 钟文强,孟庆玲,乔军,陈英,贡莎莎,王熙凤,黄运福,才学鹏. 南方农业学报. 2018(01)
[2]等温滴定量热法在蛋白质-配体相互作用中的应用[J]. 齐心洁,王玥,王彦晟,方国康,黄迎春. 生物技术通报. 2017(05)
[3]抗菌肽的来源及其临床应用研究[J]. 赵雪芹,王磊,夏小静,王青,徐彦召,杭柏林,孙亚伟,胡建和. 现代农业科技. 2017(05)
[4]天然抗菌肽及其在食品工业中的应用[J]. 刘怀然,温赛,续丹丹. 饲料研究. 2016(14)
[5]双酶切和同源重组方法构建pMIR-reporter载体的比较[J]. 马凯,胡红霞,于婧,周丹,孙艳,马磊,沈波. 中国病原生物学杂志. 2015(06)
[6]大肠杆菌Ⅰ型分泌表达系统研究进展及提高蛋白表达量的策略[J]. 王靖瑶,王天女,卢磊,张帅,赵敏. 中国生物工程杂志. 2014(06)
[7]GPC3-siRNA真核质粒载体的构建及Huh-7细胞转染[J]. 温继育,邹文俊,刘忠考,黎然,邱志东,李明意,缪辉来. 广东医学院学报. 2014(02)
[8]抗菌肽的研究进展及其应用[J]. 李冠楠,夏雪娟,隆耀航,李姣蓉,武婧洁,朱勇. 动物营养学报. 2014(01)
[9]一步法快速构建多片段连接的同源臂载体[J]. 张金脉,杨冠恒,程艳,黄英. 生物技术通讯. 2013(03)
[10]蛋白质与小分子间相互作用研究方法的进展[J]. 王洁,王岸娜,吴立根,刘佳. 农产品加工(学刊). 2013(11)
博士论文
[1]基于FRET原理的绿色纳米荧光探针的制备及应用[D]. 冯悦姝.长春理工大学 2017
[2]改良人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中分泌表达的研究[D]. 关波.江南大学 2014
硕士论文
[1]抗菌肽CGA-N12降低热带念珠菌线粒体膜电位机制初步研究[D]. 李超楠.河南工业大学 2017
[2]创伤弧菌溶细胞素致病机制与机体免疫应答的研究[D]. 李昱.大连医科大学 2017
[3]抗菌肽CGA-N46及其衍生肽生物信息学分析与抗真菌作用机理初步研究[D]. 孙亚楠.河南工业大学 2016
[4]固相合成抗菌肽CGA-N46及其衍生物生物信息学分析和生物活性研究[D]. 陆志方.河南工业大学 2016
[5]一种新的基于FRET技术和流式细胞分析的细胞凋亡诱导剂药物筛选系统[D]. 陈典华.南京大学 2014
[6]动物内源性多肽CGA-N46抗菌谱的测定及其对细胞膜的作用[D]. 卢研博.河南工业大学 2013
[7]量子点荧光共振能量转移体系的构建及其应用研究[D]. 王绪炎.华中农业大学 2010
[8]CGA-N46基因在枯草杆菌中的多顺反子表达及表达条件优化[D]. 薛雯雯.河南工业大学 2010
[9]荧光共振能量转移体系的研究与应用[D]. 高静.河北大学 2005
本文编号：3626353
【文章来源】：河南工业大学河南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
KRE9的空间结构图
http://www.ch.embnet.org/software/TMPRED_form.html 网站对 K蛋白具有 2 个可能的跨膜螺旋区（图 2）。因此抗菌肽 CGA-N12细胞内部。图 1 KRE9 的空间结构图Fig. 1 The structure of protein KRE9
图 3 ITC 模式图Fig. 3 Model of ITCITC 技术自二十多年前被提出后，最初由 Ernesto Freire 及其同事将该技术引入作用的研究领域[74]。人们通过 ITC 直接测量在恒定温度下发生的反应，以及反相关的能量变化。上世纪 ITC 主要应用于酶催化反应[75-77]，配体结合大分子分子构象变化[82]的热力学特征。大量研究证明该技术可对从简单到复杂相互作学参数进行测定。随着 ITC 技术的广泛应用，特别是 2010 年以来，伴随自动使用，软件系统的改进，其技术手段越来越成熟。在 PubMed 索引的视频期刊（Jo也已经收录了 ITC 方法[83-85]。目前基于 ITC 技术的最新研究进展包括结合相互动力学和热力学信息的 KinITC[86]，以及高亲和力结合反应的 ITC 位移分析[87, ，ITC 技术为研究蛋白质-蛋白质相互作用过程中结合自由能的大小提供了简单ITC 可以直接测量生物分子结合过程中的热量变化，被广泛应用于生物分子相热力学和动力学研究中[89]。此方法灵敏度高、重现性好，还具有原位在线无损
【参考文献】：
期刊论文
[1]少孢节丛孢菌胞外几丁质酶AO-379基因克隆及其表达分析[J]. 钟文强,孟庆玲,乔军,陈英,贡莎莎,王熙凤,黄运福,才学鹏. 南方农业学报. 2018(01)
[2]等温滴定量热法在蛋白质-配体相互作用中的应用[J]. 齐心洁,王玥,王彦晟,方国康,黄迎春. 生物技术通报. 2017(05)
[3]抗菌肽的来源及其临床应用研究[J]. 赵雪芹,王磊,夏小静,王青,徐彦召,杭柏林,孙亚伟,胡建和. 现代农业科技. 2017(05)
[4]天然抗菌肽及其在食品工业中的应用[J]. 刘怀然,温赛,续丹丹. 饲料研究. 2016(14)
[5]双酶切和同源重组方法构建pMIR-reporter载体的比较[J]. 马凯,胡红霞,于婧,周丹,孙艳,马磊,沈波. 中国病原生物学杂志. 2015(06)
[6]大肠杆菌Ⅰ型分泌表达系统研究进展及提高蛋白表达量的策略[J]. 王靖瑶,王天女,卢磊,张帅,赵敏. 中国生物工程杂志. 2014(06)
[7]GPC3-siRNA真核质粒载体的构建及Huh-7细胞转染[J]. 温继育,邹文俊,刘忠考,黎然,邱志东,李明意,缪辉来. 广东医学院学报. 2014(02)
[8]抗菌肽的研究进展及其应用[J]. 李冠楠,夏雪娟,隆耀航,李姣蓉,武婧洁,朱勇. 动物营养学报. 2014(01)
[9]一步法快速构建多片段连接的同源臂载体[J]. 张金脉,杨冠恒,程艳,黄英. 生物技术通讯. 2013(03)
[10]蛋白质与小分子间相互作用研究方法的进展[J]. 王洁,王岸娜,吴立根,刘佳. 农产品加工(学刊). 2013(11)
博士论文
[1]基于FRET原理的绿色纳米荧光探针的制备及应用[D]. 冯悦姝.长春理工大学 2017
[2]改良人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中分泌表达的研究[D]. 关波.江南大学 2014
硕士论文
[1]抗菌肽CGA-N12降低热带念珠菌线粒体膜电位机制初步研究[D]. 李超楠.河南工业大学 2017
[2]创伤弧菌溶细胞素致病机制与机体免疫应答的研究[D]. 李昱.大连医科大学 2017
[3]抗菌肽CGA-N46及其衍生肽生物信息学分析与抗真菌作用机理初步研究[D]. 孙亚楠.河南工业大学 2016
[4]固相合成抗菌肽CGA-N46及其衍生物生物信息学分析和生物活性研究[D]. 陆志方.河南工业大学 2016
[5]一种新的基于FRET技术和流式细胞分析的细胞凋亡诱导剂药物筛选系统[D]. 陈典华.南京大学 2014
[6]动物内源性多肽CGA-N46抗菌谱的测定及其对细胞膜的作用[D]. 卢研博.河南工业大学 2013
[7]量子点荧光共振能量转移体系的构建及其应用研究[D]. 王绪炎.华中农业大学 2010
[8]CGA-N46基因在枯草杆菌中的多顺反子表达及表达条件优化[D]. 薛雯雯.河南工业大学 2010
[9]荧光共振能量转移体系的研究与应用[D]. 高静.河北大学 2005
本文编号：3626353
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/3626353.html
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