蓝氏贾第鞭毛虫甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因的克

发布时间：2022-08-23 20:44

　　目的蓝氏贾第鞭毛虫（简称为贾第虫）甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因（GlMSR）,进行原核表达获得其重组蛋白。方法依据GenBank中GlMSR序列设计引物,以贾第虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码序列,将所得片段连接至质粒pET28a以构建原核表达载体pET28a-GlMSR,将pET28a-GlMSR导入大肠杆菌E.coli JM109并挑取阳性克隆进行基因测序和鉴定。用化学方法将经测序验证的重组质粒pET28a-GlMSR转化至E.coli BL21（DE3）。经异丙基硫代半乳糖苷（Isopropylβ-D-Thiogalactoside, IPTG）诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白表达结果。收集沉淀中的重组表达产物,镍柱亲和层析纯化带组氨酸标签的重组蛋白,并通过免疫印迹鉴定纯化结果。结果电泳结果显示在约624 bp处出现目的 DNA条带,表明成功得到GlMSR编码序列;PCR鉴定、酶切鉴定以及基因测序结果表明成功构建重组表达载体pET28a-GlMSR,经IPTG诱导后在沉淀中获得目的蛋白,目的蛋白分子量（Mr）约为25 000,与预期分子量（Mr）22... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 虫株、质粒和菌株
        1.1.2 主要试剂和工具酶
    1.2 方法
        1.2.1 虫体基因组DNA的提取
        1.2.2 GlMSR基因扩增
        1.2.3 连接目的片段与载体
        1.2.4 重组蛋白GlMSR的诱导表达
        1.2.5 重组蛋白的纯化
        1.2.6 重组蛋白免疫印迹分析
2 结果
    2.1 GlMSR基因的克隆
    2.2 重组质粒pET28a-GlMSR的鉴定
    2.3 重组蛋白的表达与纯化
    2.4 纯化重组蛋白的免疫印迹分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[2]河南省人体肠道原虫感染现状分析[J]. 刘颖,李素华,张雅兰,刘若凝,钱丹,杨成运,周瑞敏,贺丽君,鲁德领,邓艳,陈伟奇,赵玉玲,张红卫,许汴利.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[3]蓝氏贾第鞭毛虫核苷二磷酸激酶基因的克隆与表达[J]. 袁义雪,郑国侠,王丹丹,专行,杜萌,王云华.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(02)
[4]HIV/AIDS患者合并肠道原虫感染状况[J]. 滕雪娇,陈家旭,田利光.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2017(06)
[5]蓝氏贾第鞭毛虫感染1例[J]. 宋鹏,张永年,李浩,陈韶红.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2016(06)
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[7]贾第鞭毛虫和隐孢子虫的流行病学研究进展[J]. 魏小红,陈守义.  热带医学杂志. 2014(02)
[8]蓝氏贾第鞭毛虫中国株组蛋白H2A基因的克隆与重组表达[J]. 王云华,郑国侠,巨红妹,张霞,李雅杰.  热带医学杂志. 2011(10)
[9]中国人源蓝氏贾第鞭毛虫ppdk基因的克隆及其表达产物的鉴定[J]. 张永轻,滕美君,王云华,李雅杰.  中国病原生物学杂志. 2010(11)

硕士论文
[1]甲硫氨酸硫氧化物还原酶A对氧化应激状态下黑素细胞活性的影响[D]. 周舟.第四军医大学 2009



本文编号：3678449