PKA/AKAP121诱导神经保护性线粒体重塑对小鼠海马细胞系HT22-谷氨酸氧化应激模型的保护作用

发布时间：2022-12-17 15:56

　　目的:通过过表达AKAP121来在线粒体部分富集PKA诱导神经保护性线粒体重塑,检测线粒体抗氧化指标的变化,并探究AKAP12A/PKA诱导的线粒体重塑对小鼠海马细胞系HT22-谷氨酸氧化应激模型的保护作用,同时,在通过反复暴露于高浓度谷氨酸中诱导的HT22-R谷氨酸抵抗的细胞中,研究AKAP121/PKA以及线粒体抗氧化指标的变化。方法:HT22细胞转染AKAP121,S-AKAP84,OMM-PKA,Drp1-656D后,与对照组同时加入4m M浓度谷氨酸孵育,CCK8观察细胞活力变化。HT22细胞转染AKAP121,S-AKAP84,OMM-PKA,Drp1-656D后,在正常情况下,检测相应线粒体抗氧化指标SOD2与GSH的变化,并用免疫荧光显微镜得到线粒体融合度与线粒体含量的变化。结果:1.不同谷氨酸浓度孵育24h,HT22细胞的细胞活力变化。谷氨酸浓度为4m M时,孵育24h,HT22细胞活力为对照组的25%（P＜0.05）。4m M浓度谷氨酸毒性下AKAP121有显著的保护作用（P＜0.001）。2.OMM-GFP,S-AKAP84,OMM-PKA定位在线粒体外膜。OMM... 

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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前言
中文摘要
Abstract
英文缩略词注释表
第1章 文献综述
    1.2 背景介绍
    1.3 AMPK调节线粒体的动态变化，结构与功能
        1.3.1 AMPK监测并调控线粒体的质量与更新
        1.3.2 AMPK通过MFF水平来调节线粒体分裂
    1.4 AMPK可以作为线粒体ROS感受器
        1.4.1 缺血时ROS激活AMPK调节细胞生存能力
    1.5 AMPK激活在脑缺血，缺血再灌注及缺血预处理有不同效应
    1.6 AMPK在缺血时是一把双刃剑
    1.7 AKAP121/PKA与AMPK协同调节细胞在缺血或糖尿病中的生存
    1.8 AMPK在糖尿病中的双重作用
    1.9 AKAP121与AMPK作为靶点治疗相关疾病的展望
第2章
    2.1 PKA/AKAP121诱导神经保护性线粒体重塑对小鼠海马细胞系HT22-谷氨酸氧化应激模型的保护作用
第3章 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 细胞株与质粒
        3.1.2 药品与试剂
        3.1.3 实验仪器
    3.2 方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 细胞传代
        3.2.3 细胞冻存
        3.2.4 细胞复苏
        3.2.5 细胞96孔板种板
        3.2.6 HT22细胞系转染
        3.2.7 各转染组谷氨酸处理及CCK-8 实验
        3.2.8 总GSH, ATP测定
        3.2.9 HT22- Resistance(谷氨酸抵抗)细胞系的培育
        3.2.10 HT22细胞线粒体分离
        3.2.11 线粒体融合度测定
        3.2.12 线粒体超氧化物测定
        3.2.13 Western blot
        3.2.14 统计学方法
第4章 结果
    4.1 过表达AKAP121对谷氨酸氧化应激模型的保护作用
    4.2 过表达S-AKAP84，OMM-PKAC通过磷酸化DRP1增大了HT22细胞线粒体的融合度
    4.3 过表达AKAP121，OMM-PKAC增加了HT22细胞胞内总GSH，线粒体SOD2，减少了线粒体部分的超氧阴离子
    4.4 过表达线粒体分裂蛋白DRP1-656D-PKA假磷酸化质粒可以模拟PKA/AKAP121对HT22-谷氨酸氧化应激模型的保护作用
    4.5 HT22-RESISTANCE谷氨酸抵抗细胞系的AKAP121蛋白水平，胞内CREB信号，线粒体SOD2含量是升高的
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]T3-induced liver AMP-activated protein kinase signaling:Redox dependency and upregulation of downstream targets[J]. Luis A Videla,Virginia Fernández,Pamela Cornejo,Romina Vargas,Paula Morales,Juan Ceballo,Alvaro Fischer,Nicolás Escudero,Oscar Escobar.  World Journal of Gastroenterology. 2014(46)



本文编号：3720217