Optiprep连续密度梯度离心方法的建立

发布时间：2017-05-27 05:12

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【摘要】：目的:试验不同条件,优化Optiprep密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep连续密度梯度,为纯化病毒提供良好的参数。方法:试验不同的旋转角度、重复次数、离心时间,以及用不同浓度的Optiprep制备连续密度梯度等条件,摸索制备连续密度梯度的最佳方案,将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒(HCV),并通过q RT-PCR验证纯化效果。结果:通过各种条件的摸索,确立了制备连续密度梯度的最佳方案,即制备10%~40%Optiprep连续密度梯度,在旋转角度为85°时,1号程序设置为30 r/min离心5 s,2号程序设置为0 r/min 15 s,重复1~2程序10次。将此程序用于纯化HCV,得到了较好的纯化效果。结论:建立了制备Optiprep连续密度梯度离心的方法,为进一步提高病毒的纯化效果提供了参数。
【作者单位】： 中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所;云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;
【关键词】： Optiprep密度梯度离心 碘克沙醇 旋转角度 纯化
【基金】：北京协和医学院“协和青年基金”项目(3332015148)
【分类号】：R373
【正文快照】： 病毒的纯化一直是病毒学研究的一个难点,密度梯度离心法是病毒纯化最常使用的一种方法[1-3]。密度梯度区带离心法(简称区带离心法),是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。以往采用较

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