抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体CHO工程细胞株的构建、筛选及表达

发布时间：2017-07-29 19:25

  本文关键词：抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体CHO工程细胞株的构建、筛选及表达

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【摘要】：目的构建抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化单克隆抗体CHO工程细胞株,并进行筛选及表达。方法将抗HER2抗体重链基因Fd及轻链基因VL分别克隆至同一质粒p RH上,将构建正确的重组表达质粒命名为p HER2。通过脂质体法将p HER2转染至二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型CHO细胞(CHO-DG44)中,筛选稳定表达的工程细胞株,进行ELISA及SDS-PAGE检测。同时对抗HER2抗体高表达细胞株进行batch模拟试验。结果从近10 000株克隆中筛选获得3株备选细胞株,命名为H6、H7和H9。细胞株培养上清表达的抗体仅能与重组HER2发生特异性结合;SDS-PAGE检测结果表明,于相对分子质量50 000和25 000处可见重链和轻链的目的蛋白条带。H6、H7和H9细胞株在简单的batch悬浮培养条件下周期约为1周,抗体水平随培养时间的延长而逐渐升高,H9细胞株表达水平最高,为0.52 mg/ml。结论本研究筛选获得的工程细胞株H9具有较高的抗HER2单克隆抗体水平,为靶向治疗HER2过表达的乳腺癌和胃癌等恶性肿瘤奠定了基础。
【作者单位】： 成都蓉生药业有限责任公司科研管理部;
【关键词】： 人表皮生长因子受体 单克隆抗体 中国仓鼠卵巢细胞
【分类号】：R392
【正文快照】： 人表皮生长因子受体2(human epidermal growthfactor receptor 2,HER2)蛋白作为恶性肿瘤重要标志物之一,其过度表达在细胞的分裂、增殖、转化、促进肿瘤的转移、侵袭、黏附中发挥重要作用[1-4]。HER2是具有酪氨酸激酶活性的表皮生长因子受体家族的成员之一,其过表达常见于胃癌

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1 时成波;徐军;王X;贾重来;徐冬冬;盛军;;高效表达乙型肝炎表面抗原的CHO工程细胞株的构建[J];中国生物制品学杂志;2009年12期

2 陈琳,徐秀英,刘士辉,朱恒奇,黄培堂,黄翠芬;组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体工程细胞株生物学特性分析[J];实验生物学报;1998年02期

3 钱莉;陆家辉;秦宏超;芮程磊;陈文艳;贾筱琴;傅奕;龚卫娟;田芳;胡茂志;季明春;;转基因细胞株BaF3-mb15-RAE对IKDC功能分子表达的影响[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2014年04期

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本文编号：590735