人核糖核酸酶抑制因子siRNA慢病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2017-08-05 01:04

  本文关键词：人核糖核酸酶抑制因子siRNA慢病毒载体的构建及鉴定

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【摘要】：本实验旨在构建人核糖核酸酶抑制因子稳定干涉载体pLKO.1-ds RI,为后续观测人核糖核酸酶抑制因子干涉载体的表达对肿瘤细胞的影响奠定基础。用亚克隆法,将针对人核糖核酸酶抑制因子的干涉片段从Simple T-ds RI质粒克隆到pLK-0.1-TRC质粒,用酶切法筛选得到阳性重组质粒pLKO.1-ds RI,用测序法鉴定克隆序列正确。转染时设干扰组、空载体组和空白组三组,每组三次重复。用脂质体Cellfectin~R将pLKO.1-ds RI(干扰组)、pLKO.1-TRC(空载体组)转染进人肝癌细胞HepG2细胞中,未处理的细胞作空白组。转染后72hr用Western blotting检测细胞中核糖核酸酶抑制因子表达的变化。双酶切鉴定及测序鉴定结果均正确;Western blotting结果表明,对比空白组(1.1578±0.015)和空载体组(1.1216±0.027),干扰组RI表达(0.6119±0.048)明显下调(P0.05)。结果表明人核糖核酸酶抑制因子干涉载体pLKO.1-ds RNH1构建成功。
【作者单位】： 大连大学医学院;
【关键词】： 人核糖核酸酶抑制因子 siRNA 慢病毒载体
【基金】：大连大学本科生创新课题(2015125);大连大学本科生创新课题
【分类号】：R3416
【正文快照】： 人核糖核酸酶抑制因子(human ribonucleaseinhibitor,h RI)是一种广泛存在于细胞的可溶性酸性糖蛋白,分子量为50k D,能紧密结合血管形成因子(Angionenin,Ang)[1,2]。已有实验证实,RI可能有效地抑制肿瘤诱导血管生成[3,4]。因此人们推测h RI可能为抗肿瘤血管活性的抑制基因,有

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本文编号：622482