恶性疟原虫配子体期特异性蛋白Pfgdv1克隆表达及鉴定

发布时间：2017-08-08 19:04

  本文关键词：恶性疟原虫配子体期特异性蛋白Pfgdv1克隆表达及鉴定

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【摘要】：目的克隆恶性疟原虫配子体期特异性基因(Plasmodium falciparum gametocyte development 1 gene,Pfgdv1),体外表达和鉴定重组Pfgdv1蛋白。方法通过PCR法从恶性疟原虫感染病人血液DNA样本中扩增Pfgdv1基因,插入到原核表达载体p ET28a(+),构建p ET28a-Pfgdv1重组表达质粒,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达重组蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化重组蛋白,纯化产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定。结果 PCR扩增的Pfgdv1基因长度约为1.65 kb,重组p ET28a-Pfgdv1质粒构建成功,插入方向正确无框移,转化至E.coli BL21(DE3+)所表达的重组蛋白分子量约为67 k Da,且能被抗His标签单克隆抗体识别。结论成功克隆了Pfgdv1基因,表达并纯化了重组Pfgdv1蛋白,为进一步研究恶性疟原虫配子体期传播阻断疫苗奠定了基础。
【作者单位】： 蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室;
【关键词】： 恶性疟原虫 Pfgdv 配子体 传播阻断疫苗 原核表达
【基金】：蚌埠医学院研究生科研创新计划资助项目(Byycx1402) 安徽省教育厅自然科学研究重点项目(KJ2012-A-200) 安徽省大学生创新训练计划项目(AH201410367046,AH201410367041) 国家级大学生创新训练计划项目(201410367046,201410367041)
【分类号】：R382.31
【正文快照】： 疟疾是与艾滋病、结核并称为全球危害最为严重的疾病,是全球广泛关注的重要公共卫生问题之一。据WHO报告,2014年全球大约有33亿人口受到疟疾感染威胁,12亿人处于高风险地区;2013年新发病例 达1.98亿,其中死亡人数达58.4万例[1]。近20年来,我国疟疾疫情得到很好控制,并在2010，

本文编号：641531