分枝杆菌热休克蛋白65重组质粒的构建与原核表达

发布时间：2017-08-14 16:41

  本文关键词：分枝杆菌热休克蛋白65重组质粒的构建与原核表达

  更多相关文章： 热休克蛋白 重组质粒 融合蛋白 原核表达 分枝杆菌

【摘要】：目的研究分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)重组质粒的构建与原核表达。方法 HSP65的开放阅读框经聚合酶链反应(PCR)扩增后,经NcoⅠ与NotⅠ内切酶依次酶切,连接至酶切后的原核表达载体PET-28a中,然后将重组质粒转入大肠杆菌BL-21中,PCR筛选阳性克隆,并经DNA测序进一步验证。阳性克隆进一步扩大培养,并进行乳糖诱导,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳对菌体蛋白进行检测。结果成功扩增出1 623 bp的目的片段HSP65;测序结果显示,该片段与目的序列完全相符,重组子PET-28a/HSP65构建成功;乳糖诱导后的HSP65在大肠杆菌中实现高表达。结论分枝杆菌HSP65蛋白的成功表达,为研究其在抗肿瘤疫苗中的应用奠定了基础。
【作者单位】： 新乡医学院;新乡医学院生命科学技术学院;
【关键词】： 热休克蛋白 重组质粒 融合蛋白 原核表达 分枝杆菌
【基金】：全国大学生创新训练项目(编号:201410472040)
【分类号】：R378.91
【正文快照】： 研究表明,肿瘤细胞能表达肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原,机体免疫系统识别肿瘤抗原产生特异性免疫应答,引起效应细胞的启动或释放一系列效应分子,攻击和清除肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞生长[1]。肿瘤疫苗正是基于这一原理,采取主动免疫的方法诱导机体产生特异性免疫应答,以达到预

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐琛蓉;章锦才;赵川江;张蕴惠;;重组质粒PcDNA3.1/sTNFRⅠ在小鼠体内表达的初步研究[J];实用口腔医学杂志;2006年02期

2 成桂明;杨慧兰;;pGEX-4T-1/HSV2-gG重组质粒的构建及表达[J];中国现代医学杂志;2009年09期

3 王斌;质粒DNA的构型变化对转录的调控作用[J];遗传学报;1987年01期

4 张秀华;;重组质粒的稳定性[J];国外医药(抗生素分册);1991年03期

5 陈飞,吴红艳,刘艳玲,李莉;蚯蚓溶栓酶重组质粒遗传稳定性的研究[J];中医药学刊;2002年06期

6 马大伟;陈桂生;杜彦辉;;pGBKT7-hSOD1cDNA重组质粒的构建及鉴定[J];宁夏医学杂志;2011年06期

7 齐义鹏,黄永秀;昆虫病毒重组质粒的快速提取[J];病毒学报;1987年02期

8 徐迎佳,何奔,沈南,王彬尧,郑道声;人白介素-1β转换酶的克隆及重组质粒构建[J];上海第二医科大学学报;1999年01期

9 孙念峰;孟庆义;田爱玲;王瑞华;刘兆轩;李博;;重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL的构建及鉴定[J];中国现代普通外科进展;2010年11期

10 方潇碧;张春鸿;黄亚;林森;黄振校;吴丽萍;施清圆;李文峰;廖志苏;;重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a的构建与表达[J];实用医学杂志;2011年12期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 余胜兵;冯艾荣;周平;胡继明;;一种新的毛细管电泳动态涂层介质在质粒DNA分离中的应用[A];中国化学会第十三届有机分析与生物分析学术会议论文集[C];2005年

2 李梦南;任大明;王磊;肖伟;郑广宏;;重组质粒DNA在热处理过程中的降解/变性规律研究[A];上海市化学化工学会2007年度学术年会论文摘要集[C];2007年

3 李迪;谷鸿喜;张凤民;钟照华;程志;;pQE32-HPV18 L1重组质粒的构建及鉴定[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年（1993—2003）论文集[C];2003年

4 刘茂军;张映;邵国青;聂向庭;;重组质粒的构建、表达及活性鉴定[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年

5 宁兴旺;谢小兵;朱惠斌;王述湘;葛金文;;α-烯醇化酶重组质粒的构建及其表达形式的研究[A];第一次全国中西医结合检验医学学术会议暨中国中西医结合学会检验医学专业委员会成立大会论文汇编[C];2014年

6 赵燕;童富淡;;家蚕HMGA(BmHMGA)表达及功能初步研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年

7 徐丽;彭景ii;;重组质粒pCR3.1-brZPC'的表达及其抗生育作用[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年

8 周珊;徐修礼;马越云;刘家云;孙怡群;郝晓柯;;HBHA蛋白在结核病诊断中应用研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年

9 章军;秦燕;徐虹;陈天圣;楼士林;;利用穿梭表达重组质粒在蓝藻Synechococcus sp.PCC7942中表达胸腺素α_1[A];中国藻类学会第十一次学术讨论会论文摘要集[C];2001年

10 高方友;杨辉;张治元;何家全;刘仕勇;邱克军;;重组质粒pEGFP-mD1x5的构建及其在室管膜前下区神经干细胞中的表达研究[A];贵州省医学会神经外科学分会第七届学术交流会暨神经外科学新进展学习班论文集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 记者　耿建扩 蔺玉堂;“表达凝血八因子新的重组质粒”成功研制[N];光明日报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 张泉;重组质粒DNA的规模化生产工艺及质量鉴定研究[D];扬州大学;2006年

2 朱鸿飞;重组质粒pcDNAKCpG生物安全性研究[D];中国农业科学院;2005年

3 崔福爱;BMP-6和VEGF表达载体的构建及其促进成骨作用的实验研究[D];山东大学;2010年

4 王席娟;SP-B-C/A(-18)基因多态性与高氧肺损伤易感性关系研究[D];华中科技大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 汪小五;肺炎支原体P1-C末端特异性抗原蛋白的制备及其基因分型的研究[D];安徽医科大学;2015年

2 刘加美;组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA调控Keap1-Nrf2信号通路的相关机制研究[D];南京大学;2014年

3 王颖慧;表达HBsAg基因的重组质粒与重组腺病毒的免疫学初步研究[D];中国疾病预防控制中心;2014年

4 刘原;弓形虫ROP16的表达及其调控宿主细胞凋亡的研究[D];江苏大学;2016年

5 李梦南;热处理废弃重组质粒DNA的有效性与安全性分析[D];同济大学;2008年

6 李茜;pcDNA3.1-preS1-GFP重组质粒的构建及其在小鼠精子内的表达[D];青岛大学;2010年

7 张战锋;细胞周期依赖性蛋白激酶2重组质粒的构建与表达[D];广州中医药大学;2011年

8 黄丽春;酵母代谢木糖产乙醇重组质粒的构建[D];厦门大学;2009年

9 刘阳;刚地弓形虫HSP70基因重组质粒的构建及其诱导小鼠的细胞免疫应答[D];山西医科大学;2011年

10 杨媚娜;β转化生长因子受体Ⅱ启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建[D];吉林大学;2012年

，

本文编号：673681