一种经miniSOG标记的人腺病毒的制备

发布时间：2017-08-26 01:11

  本文关键词：一种经miniSOG标记的人腺病毒的制备

  更多相关文章： 腺病毒 IX蛋白 miniSOG 病毒拯救

【摘要】：为了探索腺病毒感染细胞后病毒核心在胞内运输的过程,本研究构建了一株经miniSOG标记IX蛋白的人腺病毒。首先,我们通过重叠延伸PCR的方法合成了miniSOG基因,将其克隆至pcDNA3表达载体后转染293细胞,荧光显微镜下可观察到miniSOG蛋白的表达,经固定,封闭,DAB-H2O2染色,OsO4固定染色后,可见表达miniSOG蛋白的细胞呈深褐色。之后将miniSOG构建至腺病毒穿梭载体pShuttle的IX基因3’端,并通过与骨架质粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183细菌内同源重组获得了重组腺病毒质粒pAd5-IXSOG。pAd5-IXSOG质粒经PacI酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组腺病毒HAdV-5-IXSOG。经过8轮扩增,超速离心纯化后获得2.0ml浓度为6.0×1011vp/mL的重组腺病毒,电子显微镜下可见完整病毒颗粒。本研究经反向遗传学技术对腺病毒载体进行改造,成功制备了经miniSOG标记的重组腺病毒HAdV-5-IXSOG,该病毒可用于腺病毒感染细胞的实时追踪。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室;中国医学科学院药物研究所;
【关键词】： 腺病毒 IX蛋白 miniSOG 病毒拯救
【基金】：国家自然科学基金项目(31400156) 国家科技重大专项课题(2013ZX10004-101)
【分类号】：R373
【正文快照】： 腺病毒载体广泛用于基因治疗及重组疫苗研究。人腺病毒呈二十面体立体对称结构,无包膜,其主要衣壳蛋白包括五邻体基(penton base)、六邻体(hexon)及纤维蛋白(fiber);次要衣壳蛋白包括VI,VIII,IX,IIIa蛋白。衣壳内部的基因组核心主要由病毒DNA,核心蛋白(V,VII,μ,IVa2,terminal，

本文编号：738726