全氟化碳对脂多糖致肺泡Ⅱ型上皮细胞钠离子通道功能受损的保护作用

发布时间：2017-10-11 15:40

  本文关键词：全氟化碳对脂多糖致肺泡Ⅱ型上皮细胞钠离子通道功能受损的保护作用

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【摘要】：目的：本研究旨在探讨全氟化碳对脂多糖致肺泡II型上皮细胞钠离子通道（ENaC）功能受损的保护作用。 方法：（1）应用LPS（10μg/ml）干预A549细胞0-6h，采用qPCR检测1L-1β、IL-6、TNF-α和ENaC-α的mRNA表达，采用western-blot检测ENaC-α蛋白表达；建立肺损伤细胞模型；（2）实验分为对照组、LPS组、PFC组和LPS/PFC组；（3）分组干预4h和6h后分别提取胞浆和胞膜蛋白，，行western-blot检测ENaC-α蛋白的表达；（4）分组干预4h，应用膜片钳全细胞记录模式检测跨膜电流变化后，标准细胞外液中加入ENaC抑制剂阿米洛利（10-5M）后再次检测，计算加入阿米洛利钠前后跨膜电流的变化及在各组间的差异；（5）将A549细胞接种至snapwell小室，培养至完全融合形成单层上皮，按前述给予分组干预4h，应用尤斯灌流室系统检测跨上皮短路电流的变化后，单层上皮顶端侧K-H溶液中加入阿米洛利后再次检测，计算加入阿米洛利前后短路电流的变化及在各组的差异。 结果：（1）LPS增加A549细胞1L-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达，4h达到最高峰，6h呈下降趋势，但仍高于对照组，LPS抑制ENaC的mRNA和蛋白表达，于4h达峰值，6h呈上升趋势，但仍低于对照组；（2）干预后4h和6h，LPS抑制了胞膜ENaC-α蛋白的表达，PFC可改善LPS导致的胞膜ENaC-α蛋白表达下调；但无论4h还是6h,LPS和PFC对胞浆ENaC-α蛋白表达无明显影响；（3）干预4h后，LPS可显著抑制经ENaC通道的钠离子跨膜钠离子电流，而PFC可改善LPS对跨膜钠离子电流的抑制；（4）干预4h后，LPS可显著抑制A549融合单层上皮的阿米洛利敏感Isc，而PFC可改善LPS对阿米洛利敏感Isc的抑制； 结论：LPS通过抑制肺泡II型上皮细胞ENaC总体蛋白表达和胞膜ENaC蛋白聚集，抑制了经ENaC通道的钠离子转运，损害了肺泡液体清除能力；PFC可能通过对LPS抑制ENaC蛋白表达、胞膜ENaC蛋白聚集的保护作用，改善了肺泡II型上皮细胞经ENaC通道的钠离子转运，对肺泡液体清除能力有保护作用。
【关键词】：急性肺损伤 全氟化碳 肺泡液体清除 上皮钠离子通道 脂多糖
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 英文缩写索引5-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-14
• 第一部分 肺损伤细胞模型的建立14-27
• 材料和方法14-23
• 结果23-25
• 讨论25-27
• 第二部分 PFC 对 LPS 致肺泡 II 型上皮细胞膜钠离子通道蛋白表达下调的保护作用27-35
• 材料和方法27-31
• 结果31-32
• 讨论32-35
• 第三部分 PFC 对 LPS 致肺泡 II 型上皮细胞钠离子跨膜转运下调的保护作用35-43
• 材料和方法35-39
• 结果39-40
• 讨论40-43
• 第四部分 PFC 对 LPS 致肺泡上皮钠离子跨上皮转运能力下调的保护作用43-54
• 材料和方法43-48
• 结果48-50
• 讨论50-54
• 结论54-55
• 参考文献55-62
• 文献综述 钠离子通道在肺泡液体清除中的调节机制62-73
• 参考文献68-73
• 攻读学位期间发表文章情况73-74
• 致谢74-75

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本文编号：1013380