miR-155对小鼠脓毒症急性肺损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2017-10-14 01:11

  本文关键词：miR-155对小鼠脓毒症急性肺损伤的保护作用及机制研究

  更多相关文章： 微小RNA-155 脓毒症急性肺损伤 自噬

【摘要】：目的通过建立脓毒症急性肺损伤(ALI)小鼠模型,观察脓毒症小鼠肺组织内miR-155表达变化,探讨其对脓毒症ALI的影响及机制。方法1.盲肠结扎穿孔术(CLP)构建脓毒症ALI小鼠模型。实验分两组:假手术对照组(Sham组)和手术组(CLP组);分别于术后0h、6h、12h、24h、48h取肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。2.SPF级BALB/c小鼠经气管内滴入miR-155agomir转染复合物,转染后6h、12h、24h、36h、72h收集肺组织标本,对照组滴入PBS、Negtive Control(NC);体内转染miR-155后1h进行CLP术,术后24h收集BALF和肺组织标本。3.分别在光镜下观察小鼠肺组织病理改变;计算肺组织湿干重比值(W/D);采用ELISA检测BALF中TNF-α、IL-1β水平,RT-q PCR检测肺组织miR-155表达,western blot检测肺组织Caspase-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、TAB2表达,电镜下观察自噬小体数量。结果1.光镜下观察到Sham组肺泡结构正常,CLP组肺泡结构紊乱、消失,肺泡间隔增厚、断裂,肺泡内可见大量炎症细胞浸润及出血;与Sham组比较,肺组织W/D、Caspase-1表达和BALF中TNF-α、IL-1β水平均随着CLP时间的延长逐渐增加,24h达到高峰(5.59±0.54vs4.03±0.18、2.15±0.30vs0.93±0.13和2367.35±624.35pg/ml vs 131.89±40.84pg/ml,152.97±52.27pg/ml vs 64.33±20.54pg/ml);miR-155从CLP术后6h开始时升高,24h达到高峰(15.66±2.06vs1.00±0.00);差异均有统计学意义(P0.05)。表明CLP术后24h成功构建小鼠脓毒症ALI模型,且miR-155在脓毒症ALI小鼠肺内表达上调。2.转染miR-155 agomir复合物24h后肺组织匀浆中miR-155表达倍数升高至(49.51±8.92)倍,miR-155在体内可稳定表达36h;在脓毒症ALI小鼠肺内,转染miR-155后,与NC组比较,光镜下观察到肺泡间隔增厚减轻、炎症细胞浸润减少,肺组织W/D及BALF中TNF-α、IL-1β水平均明显下降(5.03±0.15vs5.62±0.52和783.53±229.11pg/mlvs2029.95±766.80pg/ml,109.13±13.10pg/mlvs209.85±50.06pg/ml),肺组织中Caspase-1表达下调(1.03±0.06vs0.48±0.26);差异均有统计学意义(P0.05)。表明过表达miR-155能够减轻脓毒症ALI肺内炎症反应。3.在脓毒症ALI小鼠肺内,LC3Ⅱ/Ⅰ表达增加(2.6±0.20 vs 0.95±0.12),电镜下观察到自噬小体增加(4.8±0.84 vs 1.0±0.70);转染miR-155后,在脓毒症ALI小鼠肺内TAB2表达下调(0.51±0.07vs1.11±0.13)、LC3Ⅱ/Ⅰ表达增加(1.89±0.15vs1.00±0.07),自噬小体数量增加(8.50±0.76vs3.33±0.42);差异均有统计学意义(P0.05)。表明miR-155可能通过靶向TAB2上调脓毒症ALI小鼠肺内自噬。结论脓毒症ALI小鼠肺组织中miR-155表达增加,miR-155可能通过靶向TAB2蛋白,上调自噬,抑制Caspase-1的表达,减少IL-1β、TNF-α等炎症因子的释放,从而减轻脓毒症ALI。
【关键词】：微小RNA-155 脓毒症急性肺损伤 自噬
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7;R563
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-12
• 第1章 引言12-14
• 第2章 材料与方法14-27
• 2.1 主要试剂与仪器14-19
• 2.1.1 主要试剂14-15
• 2.1.2 主要试剂配置15-18
• 2.1.3 主要仪器18-19
• 2.2 实验动物19
• 2.3 实验分组及处理19-20
• 2.4 实验方法及观察指标20-27
• 2.4.1 脓毒症肺损伤模型建立20
• 2.4.2 体内转染20
• 2.4.3 肺组织及肺泡灌洗液收集20
• 2.4.4 HE染色20-21
• 2.4.5 ELISA检测21
• 2.4.6 Western blot检测21-22
• 2.4.7 实时定量PCR22-26
• 2.4.8 电镜检测自噬小体26
• 2.4.9 统计学方法26-27
• 第3章 结果27-37
• 3.1 miR-155在脓毒症ALI小鼠肺内表达上调27-32
• 3.1.1 CLP术后 24h能够构建脓毒症急性肺损伤模型27-31
• 3.1.2 CLP术后小鼠肺内miR-155表达31-32
• 3.2 miR-155能减轻脓毒症ALI小鼠肺内炎症反应32-34
• 3.2.1 经气道内转染miR-155能够在肺内均匀分布32
• 3.2.2 转染miR-155后脓毒症ALI小鼠肺内炎症反应减轻32-34
• 3.3 miR-155减轻脓毒症ALI小鼠肺内炎症反应的机制34-37
• 3.3.1 CLP术后小鼠肺内自噬表达上调34-35
• 3.3.2 过表达miR-155后脓毒症ALI小鼠肺内自噬上调35
• 3.3.3 过表达miR-155后脓毒症ALI小鼠肺内TAB2表达下调35-37
• 第4章 结论37-38
• 第5章 讨论38-41
• 致谢41-42
• 参考文献42-45
• 攻读学位期间的研究成果45-46
• 综述 microRNAs在急性肺损伤中的研究进展46-49
• 参考文献48-49

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 阎锡新;刘威威;李帅;;脓毒症发病机制及集束化治疗[J];临床荟萃;2007年22期

2 常文秀;张金钟;曹书华;;脓毒症研究的综合思路[J];医学与哲学(临床决策论坛版);2007年09期

3 幸泽茂;卢君强;;脓毒症临床治疗的研究进展[J];广东医学院学报;2008年06期

4 康焰;;脓毒症的现代诊断与治疗[J];中国呼吸与危重监护杂志;2009年02期

5 杨乐;邹晓静;李树生;万磊;姚尚龙;杨光田;;脓毒症心肌抑制研究进展[J];内科急危重症杂志;2010年01期

6 李文亮;张锦;;脓毒症休克患者免疫细胞变化与疾病演变及预后关系的研究[J];中国呼吸与危重监护杂志;2010年04期

7 张娜;谢淑霞;林广裕;;儿科常见严重病毒性脓毒症的发病机制及其治疗进展[J];实用儿科临床杂志;2010年18期

8 杨斌;文雅;;恶性肿瘤患者并发脓毒症39例临床分析[J];中国药物与临床;2011年10期

9 段青和;万艳;詹福寿;;经皮肾镜碎石取石术后尿脓毒症休克的诊治体会[J];中国医学工程;2012年01期

10 伏晓琳;刘晓义;鲁彦;郭雅琼;李宏宝;周荣;;糖调节蛋白78在脓毒症损伤心肌中表达的意义[J];医学研究杂志;2012年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 任海波;许卫江;;脓毒症休克治疗进展[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年

2 郑江;;天然药物拮抗脓毒症的研究进展[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年

3 金凤衿;;输新鲜血治疗脓毒症休克3例[A];2000年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2000年

4 马中富;;脓毒症[A];2009年全国危重病急救医学学术会议论文汇编[C];2009年

5 岳茂兴;;严重外科脓毒症的诊断和临床救治进展[A];第五届全国灾害医学学术会议暨常州市医学会急诊危重病及灾害医学专业委员会首届年会学术论文集[C];2009年

6 刘长文;;脓毒症机体发生了什么?[A];2009年浙江省危重病学学术年会论文汇编[C];2009年

7 何聪;赵鹤龄;;不同药物对脓毒症休克大鼠诱导型一氧化氮合酶及内皮素、肾脏细胞凋亡的影响[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年

8 莫绍春;马春林;;浅谈脓毒症休克的中医药治疗[A];首届全国中西医结合重症医学学术会议暨中国中西医结合学会重症医学专业委员会成立大会论文汇编[C];2010年

9 方宇;周钢桥;王志富;冯凯;罗志毅;庞伟;李垒;凌焱;李玉霞;刘保池;;髓样分化因子88基因多态性与中国人群脓毒症易感性的研究[A];第六届全国中西医结合灾害医学学术会议学术论文集[C];2010年

10 刘旭;张_g;;脓毒症心功能变化及其监测的研究进展[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前4条

1 本报记者 徐述湘;脓毒症诊疗研究期待突破[N];中国医药报;2007年

2 北京中医药大学东直门医院急诊科;基于四个环节辨治脓毒症[N];中国医药报;2009年

3 特约记者 石谙丁;小儿脓毒症抗菌要领(三)[N];医药经济报;2011年

4 顾泳 肇晖 周霄 赖鑫琳;方邦江：急诊“快郎中”[N];中国中医药报;2014年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 邬明;MicroRNA-23b调节脓毒症血管内皮细胞炎症因子的表达及在脓毒症患者外周血白细胞的表达[D];第三军医大学;2015年

2 陈军;腹腔开放疗法治疗腹腔感染伴腹腔间隙综合征肝功能损害的研究[D];南京大学;2009年

3 吴凡;乌司他丁及连续静脉—静脉血液滤过治疗脓毒症休克的临床及细胞学研究[D];南方医科大学;2015年

4 李霜;脓毒症的细胞生物治疗新机制—间充质干细胞抑制巨噬细胞炎症复合体3的激活[D];第四军医大学;2015年

5 周敏;HMGB1-PTEN信号对脓毒症肺损伤调节性T细胞的影响及机制[D];安徽医科大学;2015年

6 王华兵;CD4~+CD25~+调节T细胞/Thl7细胞在脓毒症大鼠中的作用[D];武汉大学;2015年

7 曹守根;富含n-3多不饱和脂肪酸的肠外营养对脓毒症免疫功能保护作用的实验研究[D];南京大学;2011年

8 王曾庚;β-受体阻滞剂治疗脓毒症相关心功能不全的临床与基础研究[D];南昌大学;2016年

9 黄炜;骨髓间充质干细胞对小鼠脓毒症后心功能障碍的疗效及机制研究[D];第四军医大学;2016年

10 刘志慧;帕瑞昔布钠对脓毒症肠屏障功能的保护效应及机制研究[D];天津医科大学;2016年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 林国;乌司他丁预处理对脓毒症大鼠肝组织基因表达及相关通路的影响[D];福建医科大学;2015年

2 胥朵;脓毒症大鼠肠组织IL-6/STAT3信号通路对HMGB1表达的调控作用[D];福建医科大学;2015年

3 张振飞;乙酰胆碱及M型乙酰胆碱受体在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用研究[D];河北联合大学;2014年

4 赵利;HO-1在脓毒症大鼠肺组织中的表达及意义[D];石河子大学;2015年

5 崔雷;低分子肝素对脓毒症大鼠肺血管内皮细胞功能的影响[D];石河子大学;2015年

6 夏为;ICU脓毒症患者临床特征及死亡相关因素分析[D];河北医科大学;2015年

7 张力;左西孟旦对严重脓毒症及脓毒症休克心肌抑制患者心功能的影响[D];河北医科大学;2015年

8 朱永蒙;胸腺五肽对脓毒症大鼠肾损伤保护作用的实验研究[D];内蒙古大学;2015年

9 赵志锐;THP-1细胞中miRNA-223、miRNA-15a和miRNA-16脓毒症相关靶基因验证[D];中国人民解放军医学院;2015年

10 李小双;地塞米松对脓毒症小鼠CD11b~+Gr-1~+髓源抑制性细胞的影响[D];安徽医科大学;2015年

，

本文编号：1028131