气道平滑肌细胞内mRNA结合蛋白HuR对α-肌动蛋白表达的影响

发布时间：2017-10-28 06:18

  本文关键词：气道平滑肌细胞内mRNA结合蛋白HuR对α-肌动蛋白表达的影响

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【摘要】：研究目的：人气道平滑肌细胞作为气道最主要的组成部分,其形态功能异常是哮喘的重要病理生理变化之一,血小板源性生长因子在损伤的气道上皮细胞中有较高的表达,可以刺激平滑肌细胞的增生以及细胞内多种蛋白的合成增加,从而引起平滑肌细胞形态、功能的改变,故血小板源性生长因子在哮喘的发生发展中发挥着重要的作用。a-肌动蛋白是人气道平滑肌细胞的特征性标志物,其含量可以反映人气道平滑肌细胞的数量及其收缩能力的改变。作为最具代表性的mRNA结合蛋白,HuR可与目的蛋白mRNA 3'UTR的AREs结合,从细胞核穿梭入细胞质,使mRNA翻译增加,下游蛋白表达量增加；研究表明,α-肌动蛋白mRNA的3’端也存在AREs,所以我们猜测,HuR蛋白可能与α-SMA mRNA 3'UTR的AREs结合,增强其稳定性,从而增加a-SMA蛋白量的表达。本研究采用体外培养人气道平滑肌细胞的方法,应用血小板源性刺激因子刺激模拟哮喘的病理状态,观察HuR蛋白对人气道平滑肌细胞中α-SMMA表达的影响。研究方法：1.分组：①PDGF 0 h组；②PDGF 6 h组；③PDGF 12 h组；④PDGF 24 h组； ⑤siRNA+PDGF 0 h组；⑥siRNA+PDGF 12 h组；⑦consiRNA+PDGF 0 h组； ⑧consiRNA+PDGF 12 h组；2.应用Western blot,检测血小板源性刺激因子刺激后,人气道平滑肌细胞中人抗原R蛋白、α-SMA蛋白的水平。3.应用RT-PCR方法,检测各组人气道平滑肌细胞中HuR及α-SMA的RNA水平。4.使用siRNA沉默HuR蛋白,研究血小板源性刺激因子对人气道平滑肌细胞中α-SMA表达的影响。结果：血小板源性刺激因子呈时间依懒性增强细胞内HuR及α-SMA的表达,各组细胞HuR蛋白及mRNA相对表达量分别为：①PDGF刺激0 h组：0.23±0.09、1.00±0.00: ②PDGF刺激6 h组：0.42±0.11、1.09±0.03：③PDGF刺激12 h组：0.93±0.21、1.16±0.03；④PDGF刺激24 h组：1.37±0.28、1.27±0.02；(均P0.05)；各组α-SMA蛋白以及mRNA相对表达量分别为：①PDGF刺激0 h组：1.03±0.08、1.00±0.00；②PDGF刺激6 h组：1.20±0.09、1.17±0.02；③PDGF刺激12 h组：1.39±0.11、1.23±0.02；④PDGF刺激24 h组：1.58±0.10、1.45±0.03；(均P0.05)。siRNA特异沉默HuR后,α-SMA表达量也相应减弱。HuR沉默后,平滑肌细胞中PDGF诱导的α-SMA的表达减少,HuR及α-SMA的蛋白相对表达量分别为：consiRNA+PDGF 0 h组：1.20±0.11、0.344±0.07；consiRNA+PDGF 12 h组：1.50±0.10、0.82±0.12; siHuR+PDGF 0h组：1.23±0.13、0.37±0.09；siHuR+PDGF12h组：0.89±0.11、0.35±0.08。siHuR+PDGF0h组与consiRNA+PDGF 0 h组HuR及α-SMA蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均P0.05),而特异的HuR干扰RNA转染细胞能显著降低HuR的表达,siHuR+PDGF 12h组HuR蛋白相对表达量显著低于consiRNA+PDGF 12h组(P0.05)；同时PDGF诱导的a-SMA蛋白表达升高受到显著抑制,siHuR+PDGF 12h组α-SMA蛋白相对表达量低于consiRNA+PDGF 12h组(P0.05)。结论：1.PDGF刺激可增力HBSMC中HuR及α-SMA的表达；2.HuR参与PDGF诱导的α-SMA表达过程。
【关键词】：人抗原 气道平滑肌细胞 血小板源性生长因子 α-肌动蛋白
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R56
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符号说明10-11
• 前言11-16
• 材料与方法16-27
• 结果27-28
• 附图28-32
• 讨论32-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 致谢44-45
• 攻读学位期间发表的学术论文45-46
• 学位论文评阅及答辩情况表46

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本文编号：1107005