HMGB1对支气管上皮细胞分泌哮喘相关炎症因子的影响及作用机制的研究

发布时间：2017-11-01 00:19

  本文关键词：HMGB1对支气管上皮细胞分泌哮喘相关炎症因子的影响及作用机制的研究

  更多相关文章： HMGB1 16-HBE 炎症因子 受体 信号通路

【摘要】：目的：通过体外细胞实验,探讨HMGB1是否参与调节支气管上皮细胞(16-HBE)分泌哮喘相关炎症因子的病理生理过程,并进一步探讨HMGB1参与上述调控过程的机制。方法：选取16-HBE细胞株进行体外培养,(1)、细胞分组：对照组、HMGB1-100ng/ml、HMGB1-500ng/ml、HMGB1-2000ng/ml,提取上述四组实验细胞的mRNA (24h)、细胞培养上清(48h)以及细胞裂解液(48h),qPCR和ELISA检测上述样品中TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、 IL-1β、TNF-α炎症因子mRNA及分泌量水平；qPCR和Western blot检测上述细胞分组中RAGE、TLR2、TLR4 mRNA及蛋白表达水平；(2)分别使用拮抗RAGE (20μg/ml). TLR2 (20μg/ml). TLR4 (20μg/ml)的抗体后,用ELISA检测TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、IL-1β、TNF-α的表达变化。(3)、分别用SB202190 (10μM)、U0126 (10μM)、LY294002(10μM)抑制p38 MAPK、ERK1/2、PI3K通路后,Western blot检测细胞裂解液中p38、ERK1/2和PI3K蛋白磷酸化情况,ELISA检测细胞上清液中TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、IL-1β、TNF-α分泌量的变化。结果：(1)、HMGB1可增加16-HBE TNF-α、TSLP、MMP-9、VEGF的表达和释放。相对于对照组,HMGB1-500g/ml可明显增加16-HBE TNF-α、 TSLP、MMP-9、VEGF的mRNA表达和蛋白的释放(P0.05),HMGB1-2000g/ml可进一步增加上述炎症因子的表达和释放,相对于HMGB1-500ngml有统计学意义(P0.05)。HMGB1不能增加EGF、IL-6、IL-8、IL-1β的表达和释放(P0.05)。(2)、HMGB1可增加16-HBE RAGE的表达。相对于对照组,HMGB1-500g/ml明显增加RAGE的mRNA及蛋白的表达(P0.05), HMGB1-2000g/ml可进一步增加RAGE的mRNA及蛋白的表达,相对于 HMGB1-500ngml有统计学意义(P0.05)。(3)、HMGB1可激活16-HBE细胞的p38 MAPK、ERK1/2通路。使用通道抑制剂后,相对于HMGB1干预组,抑制p38MAPK(减少约45%～60%)比抑制ERK1/2(减少约10%～30%)更能明显减少16-HBE TNF-α、TSLP、MMP-9、VEGF的表达。结论：1、HMGB1可通过增加16-HBE分泌哮喘相关炎症因子TNF-α、 TSLP、MMP-9、VEGF的表达,从而激活16-HBE的炎症反应；2、上述调控过程是HMGB1通过上调RAGE表达,激活p38 MAPK和ERK1/2通路实现的；较于ERK1/2, p38 MAPK在这一调控过程中发挥更重要的作用。
【关键词】：HMGB1 16-HBE 炎症因子 受体 信号通路
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 个人简历3-5
• 缩略词5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 第一部分 HMGB1在支气管上皮细胞分泌哮喘相关炎症因子中的作用12-28
• 材料与方法13-22
• 结果22-26
• 讨论26-28
• 第二部分 HMGB1增加支气管上皮细胞分泌哮喘相关炎症因子表达的机制28-50
• 材料与方法29-36
• 结果36-46
• 讨论46-50
• 全文小结50-52
• 参考文献52-61
• 综述61-76
• 参考文献68-76
• 致谢76-77
• 攻读硕士学位期间发表论文77

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本文编号：1124419