火把花根对油酸肺损伤肺紧密连接蛋白Claudin和ZO-1表达的调节及其机制研究

发布时间：2017-11-04 20:16

  本文关键词：火把花根对油酸肺损伤肺紧密连接蛋白Claudin和ZO-1表达的调节及其机制研究

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【摘要】：目的通过观察紧密连接蛋白Claudin-2、Claudin-5及ZO-1在油酸致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺组织中表达的变化及火把花根对其调节作用,探讨火把花根对油酸型ALI大鼠肺组织紧密连接蛋白Claudin和ZO-1表达的调节及其机制,为火把花根在临床治疗ALI提供理论和实验依据。方法1.70只雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为正常对照组(C组,n=10)、ALI组(A组,n=15)和火把花根[H1、H2、H3(500、600和700mg·kg-1·d-1),n=15·group]给药组。给药周期10天。2.A组生理盐水2ml连续灌胃10天,第10天,灌胃1h后,尾静脉注射油酸(0.04m L·kg-1)建立大鼠ALI模型;H组火把花根片研磨后溶于生理盐水中,连续灌胃10天,分每天2次,第10天灌胃后1h,和模型组一样注射同等剂量油酸;C组生理盐水2ml连续灌胃10天,第10天,灌胃1h后,尾静脉注射生理盐水(0.04m L·kg-1)。3.尾静脉注射后6h麻醉大鼠,腹主动脉采血、支气管肺泡灌洗液(BALF),BCA法测定肺通透指数(LPI);取肺组织,测定湿/干质量比(W/D)。3.取肺组织固定包埋,苏木素-伊红(HE)染色法光镜下观察肺组织形态学变化,进行肺损伤评分(LIS);电镜下观察肺组织超微病理学改变。4.用免疫组织化学法测定大鼠肺组织Claudin-2、Claudin-5及ZO-1的定位和表达。5.用Western Blot法检测大鼠肺组织Claudin-2、Claudin-5及ZO-1蛋白的表达量。结果1.各组大鼠肺组织病理形态学改变大体观察:C组肺组织未见明显异常;A组肺组织肿胀,表面广布出血点;H组肺组织轻度肿胀,H2组减轻更明显。光镜下观察:C组肺泡上皮组织结构完整,肺泡腔清晰,壁光滑,肺泡腔内无渗液;A组肺泡壁欠完整,肺泡萎陷、肺间隔增宽、间质水肿、弥漫性出血,肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润,红细胞渗出伴血浆蛋白渗漏;H组肺组织损伤减轻,炎性细胞及红细胞渗出减少;H2组减轻更明显。与C组比较,A组LIS明显升高(P0.01);与A组比较,H组LIS降低(P0.05);H2组降低更明显(P0.01)。电镜下观察:C组肺毛细血管基底膜、内皮细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞均正常;A组肺泡腔内出血,毛细血管内皮细胞损伤,基底膜破坏,Ⅱ型肺泡上皮细胞部分板层小体排空,细胞间连接结构破坏;H组损伤减轻,基底膜完整,细胞间连接完整;H2组改善显著。2.各组大鼠肺W/D、LPI变化与C组比较,A组W/D和LPI明显升高(P0.01);与A组比较,H组W/D和LPI降低(P0.05),H2组降低更明显(P0.01)。3.各组大鼠肺组织紧密连接结构蛋白Claudin-2、Claudin-5及ZO-1的表达变化油酸诱导大鼠ALI可降低支气管粘膜上皮细胞Claudin-2及ZO-1蛋白的表达(P0.01),火把花根预先处理可升高Claudin-2及ZO-1蛋白的表达(P0.01),H2组优于H1及H3组(P0.05)。油酸诱导大鼠ALI可升高肺泡上皮细胞Claudin-5并减低ZO-1蛋白的表达(P0.01),火把花根预先处理可降低Claudin-5及升高ZO-1蛋白的表达(P0.01),H2组优于H1及H3组(P0.05)。油酸诱导大鼠ALI可降低肺血管内皮细胞Claudin-5及ZO-1蛋白的表达(P0.01),火把花根预先处理可升高内皮细胞Claudin-5及ZO-1蛋白的表达(P0.01),H2组优于H1及H3组(P0.05)。结论1.ALI时支气管粘膜上皮紧密连接蛋白Claudin-2及ZO-1表达下调,肺毛细血管内皮Claudin-5及ZO-1表达下调、肺泡上皮Claudin-5表达上调。2.火把花根可通过上调支气管粘膜紧密连接蛋白Claudin-2、肺血管内皮细胞Claudin-5及骨架蛋白ZO-1,下调肺泡上皮Claudin-5的表达,降低肺上皮及血管内皮细胞的通透性,恢复肺上皮及血管内皮的屏障功能。对油酸所致大鼠急性肺损伤有一定保护作用。3.火把花根对ALI肺有保护作用,600mg(kg·d)-1为最适剂量。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562

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本文编号：1140948