mT0R-Cdc42信号通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能低下中的作用及机制

发布时间：2017-11-04 22:02

  本文关键词：mT0R-Cdc42信号通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能低下中的作用及机制

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【摘要】：目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白-细胞分裂周期蛋白42(m TOR-Cdc42)信号通路在慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能低下中的作用。方法:将40只SPF级8周龄雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为健康对照组、慢阻肺组、健康雷帕霉素组及慢阻肺雷帕霉素组,每组10只。采用90天单纯香烟烟雾暴露法建立慢阻肺小鼠模型,造模结束后观察各组小鼠的肺功能及病理变化,分离小鼠AM,其中健康雷帕霉素组及慢阻肺雷帕霉素组用终浓度10nmol/L雷帕霉素孵育24h。采用流式细胞术检测小鼠AM吞噬异硫氰酸酯荧光素标记大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测AM m TOR及Cdc42 m RNA的表达;采用蛋白印迹(Western Blot)法检测AM m TOR、磷酸化-m TOR(p-m TOR)以及Cdc42蛋白的表达;采用小G蛋白活性(G-LISA)试剂盒检测AM Cdc42的活性;采用激光共聚焦显微镜观察AM细胞骨架变化。结果:(1)慢阻肺小鼠模型的肺功能及肺组织病理改变:吸气峰流速(PIF)、呼气峰流速(PEF)和呼出50%潮气量时的流速(EF50):慢阻肺组(7.5±1.0、4.67±0.6、3.29±0.43)明显低于健康对照组(11.61±1.12、7.63±0.44、5.05±0.37)(均P0.01);慢阻肺小鼠肺组织光镜下可见明显的支气管炎症和肺气肿改变,健康对照组小鼠无上述改变。(2)AM吞噬FITC-E.coli的能力:用平均荧光强度(MFI)和吞噬阳性细胞百分比(吞噬%)表示:慢阻肺组(4060±590、28.65±1.26)较健康对照组(9190±988、67.50±4.56)明显降低(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素组(4856±762、38.31±1.71)比慢阻肺组增高(P0.05或P0.01);健康雷帕霉素组(9207±967、67.91±3.64)较健康对照组无差异。(3)AM m TOR、Cdc42 m RNA的表达:慢阻肺组AM m TOR、Cdc42 m RNA的表达(2.62±0.46、2.56±0.50)较健康对照组(1.00±0.00、1.00±0.00)明显增加(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素组AM m TOR、Cdc42 m RNA的表达(1.40±0.36、1.38±0.34)较慢阻肺组明显降低(均P0.01);健康雷帕霉素组AM m TOR、Cdc42 m RNA的表达(0.94±0.37、0.90±0.34)较健康对照组无差异。(4)AM m TOR、p-m TOR以及Cdc42蛋白表达:慢阻肺组(1.3047±0.5188、1.4645±0.4330、1.6121±0.3749)较健康对照组(0.4829±0.2674、0.5798±0.2552、0.6671±0.2168)明显增加(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素组(0.8996±0.6634、0.9208±0.2771、0.9143±0.4764)较慢阻肺组降低(P0.05或P0.01);健康雷帕霉素组(0.4725±0.2845、0.5592±0.2176、0.6368±0.22)较健康对照组无差异。(5)AM Cdc42的活性:慢阻肺组(0.4591±0.0853)较健康对照组(0.2995±0.0674)明显升高(P0.01);慢阻肺雷帕霉素组(0.3616±0.060)较慢阻肺组降低(P0.01);而健康雷帕霉素组(0.2668±0.0572)较健康对照组无差异。(6)AM细胞骨架变化:慢阻肺组AM细胞周围可见丝状伪足伸出杂乱、长短不一,板状伪足面积增加;慢阻肺雷帕霉素组AM细胞形态规则,呈圆形或椭圆形,周围可见较长的丝状伪足;健康对照组和健康雷帕霉素组AM细胞形态规则,呈圆形或者椭圆形,细胞周围未见明显的丝状伪足。(7)相关性分析:各组小鼠AM m TOR和Cdc42的m RNA、蛋白,p-m TOR蛋白以及Cdc42的活性与AM吞噬FITC-E.coli的平均荧光强度均呈负相关(P0.05或P0.01);各组小鼠AM m TOR的m RNA、蛋白及p-m TOR蛋白与Cdc42的m RNA、蛋白和活性均呈正相关(P0.05或者P0.01)。结论:单纯香烟烟雾可复制慢阻肺小鼠模型;慢阻肺小鼠AM吞噬功能降低;m TOR-Cdc42信号通路在慢阻肺小鼠AM中处于活化状态;m TOR-Cdc42信号通路活化致慢阻肺小鼠AM细胞骨架异常重排与其吞噬功能低下有关;雷帕霉素抑制慢阻肺m TOR-Cdc42信号通路,部分恢复慢阻肺小鼠AM吞噬功能。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563.9

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1 王云洁;mT0R-Cdc42信号通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能低下中的作用及机制[D];兰州大学;2016年

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本文编号：1141294