血吸虫感染鼠树突状细胞抑制过敏性哮喘的机制

发布时间：2017-11-22 06:04

  本文关键词：血吸虫感染鼠树突状细胞抑制过敏性哮喘的机制

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【摘要】：目的研究日本血吸虫(SJ)感染鼠树突状细胞(DC)在抑制过敏性哮喘中的作用机制。方法第一部分,利用过继转移实验研究SJ感染鼠DC亚型在抑制过敏性哮喘疾病中的作用,我们用CD8α+磁珠和CD11c+磁珠分离纯化SJ感染鼠、SEA致敏鼠及正常鼠DC亚群CD8α+CD11c+及CD8α-CD11c+细胞,一部分用于qRT-PCR检测各DC亚型分泌细胞因子的表达,另一部分通过尾静脉过继转移给正常小鼠(5×105 DC/只),1 h后诱发哮喘。4周后取小鼠肺组织作病理切片,观察其炎症变化。收集小鼠脾细胞培养的上清液、肺泡灌洗液、血清,用于检测细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、TGF-β及OVA特异性IgE水平;第二部分,探讨SEA刺激后DC在诱导CD4+T分化方向改变中的作用。我们在体外培养骨髓DC,并用可溶性虫卵抗原(SEA)刺激18h,以LPS刺激作为阳性对照,以Medium刺激作为阴性对照。流式细胞术(FACS)、免疫组化和qRT-PCR检测刺激后DC表面标志和分泌细胞因子的变化。将刺激后的DC与OVA诱导哮喘小鼠脾脏中的CD4+T共培养48h、72h后用qRT-PCR的方法检测CD4+T分泌细胞因子的变化;第三部分,从支气管粘液分泌的角度探讨SJ感染小鼠抑制过敏性哮喘的机制。我们用SJ感染小鼠以及过继转移SEA致敏鼠DC亚型并诱发哮喘后取小鼠肺脏做HE和PAS染色并检测肺部MUC5ACmRNA表达情况,观察炎症和黏液分泌的变化。利用qRT-PCR检测肺部IL-13mRNA表达的变化,用IHC观察小鼠肺部IL-13和CD4+T的表达位置。体外培养骨髓DC并用SEA刺激后qRT-PCR检测IL-13mRNA的变化,将DC与CD4+T共培养48h和72h分别后用qRT-PCR检测CD4+T表达IL-13mRNA的变化。结果第一部分,qRT-PCR法检测显示CD8α-DC与CD8α+DC相比无论是感染组还是正常组CD11b mRNA水平均明显降低(P0.05),SJCD8α-DC组的CD80m RNA、CD86mRNA水平相对于SJCD8α+DC明显下降(P0.05),而IL-10mRNA水平明显升高(P0.05),TGF-βmRNA(P0.001)和IL-12 mRNA表达降低(P0.05)。肺部病理学结果显示过继转移SJ/SEA小鼠CD8α-DC与其他组相比炎症明显减轻(P0.05)。ELISA检测血清中OVA特异性IgE结果显示过继转移SJ/SEA小鼠CD8α-DC组与其他组相比明显下降(P0.05),检测过继转移SJ/SEA小鼠CD8α-DC组的BALF和脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5水平明显升高(P0.05),而IL-10、TGF-β水平明显升高(P0.05)。第二部分,FASC检测SEA刺激后DC与LPS刺激后DC相比,表面标志CD80、CD86、CD40表达下降。IHC检测结果显示SEADC与LPSDC相比,CD11c表达率降低。qRT-PCR检测结果显示SEADC与LPSDC相比,表面标志CD80m RNA(P0.05)、CD86mRNA表达下降(P0.05),SEADC与MediumDC相比细胞因子IL-1βmRNA(P0.05)、IL-10 mRNA(P0.05)、IL-12 mRNA(P0.05)、IL-6mRNA(P0.05)、IL-23 mRNA(P0.05)表达升高,TGF-βmRNA表达无显著性差异。SEADC诱导OVA CD4+T与MediumDC相比表达IFN-γmRNA量降低(P0.05),IL-4mRNA表达升高(P0.05),IL-10mRNA表达升高(P0.05),IL-17mRNA表达量低(P0.05)。第三部分,SJ感染小鼠并诱发哮喘后肺部病理HE和PAS染色结果结果显示SJ+OVA组小鼠与OVA组相比支气管粘液分泌减轻,肺部MUC5AC表达减弱(P0.01)。肺部IHC结果显示SJ+OVA组小鼠与OVA组相比IL-13表达区域减少,并且通过与CD4合染发现IL-13主要由CD4+T分泌。qRT-PCR检测结果显示SJ+OVA组小鼠肺部IL-13mRNA与OVA组相比明显下降(P0.05),ELISA检测脾细胞培养上清液中IL-13表达下降(P0.05)。过继转移SJ感染鼠DC到正常小鼠并诱发哮喘后发现脾细胞培养上清液中IL-13与过继转移正常小鼠DC并诱发哮喘组小鼠相比表达下降(P0.05)。体外培养骨髓DC细胞,qRT-PCR检测结果显示SEADC与LPSDC相比,IL-13mRNA表达下降(P0.05)。将DC与CD4+T共培养,qRT-PCR检测结果显示SEADC诱导CD4+T表达IL-13mRNA与LPSDC相比明显下降(P0.05)。结论SEA刺激后DC处于低分化状态,并且可以诱导CD4+T向Tregs方向分化。SJ/SEA小鼠CD8α-CD11c+D可以通过分泌IL-10等细胞因子促进Tregs的分化从而抑制过敏性哮喘的发生。SJ感染小鼠DC还可以抑制CD4+T分泌IL-13从而抑制支气管粘液的分泌。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25;R532.21

【共引文献】

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本文编号：1213692