Sidt2基因剔除小鼠的肺形态学改变及相关信号通路研究

发布时间：2017-12-01 19:07

  本文关键词：Sidt2基因剔除小鼠的肺形态学改变及相关信号通路研究

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【摘要】：目的:通过对Sidt2基因剔除(Sidt2-/-)小鼠的肺组织超微结构观察和相关分子学研究,探讨Sidt2基因对小鼠肺脏的形态学影响及与内质网应激、细胞凋亡相关的信号通路分析。方法:1、将利用LoxP-Flox-LoxP系统,基因重组及打靶技术获得的Sidt2-/-小鼠模型,与野生型B129品系小鼠合笼交配,鼠尾提取DNA进行基因型鉴定,挑选出子代Sidt2-/+小鼠,同笼交配,再挑选出子代Sidt2-/-、Sidt2-/+雄鼠为实验组,以同窝或相同批次出生的野生型雄鼠为对照。进行DNA、RNA和Western鉴定后行肺组织光镜和电镜观察形态学观察。2、行Sidt2-/-、Sidt2+/+小鼠肺组织的Bip和Caspase3 activity的免疫组化检测。3、Western blot检测内质网应激和凋亡相关分子:BIP、p-eif2α、ire1α、chop、Caspase3 activity、Caspase3。4、在人类非小细胞肺癌A549水平上用质粒干扰Sidt2的表达,进一步验证BIP表达情况。结果:1、从DNA、RNA、蛋白质水平验证模型构造成功。2、Sidt2-/-小鼠生长发育、应激反应等一般方面落后于野生型小鼠。光镜下对照组小鼠肺泡壁较光滑,仅有少许炎症细胞浸润;模型鼠肺泡间质内毛细血管扩张充血,炎症细胞呈多处灶状分布。电镜下对照组小鼠的肺上皮细胞结构较规则;模型鼠可见肺泡上皮细胞崩解坏死,毛细血管充血及基底膜增厚的表现。3、免疫组化检测发现Sidt2-/-小鼠肺组织的Bip和Caspase3 activity表达量比对照组的表达量低(P0.05)。4、Western blot检测发现:Sidt2-/-、Sidt2-/+小鼠肺组织的BIP、p-eif2α、ire1α、Caspase3 activity、Caspase3表达量比对照组表达量低(P0.05),但CHOP表达量正好相反,在Sidt2-/-、Sidt2-/+小鼠肺组织的表达多于对照组(P0.05)。5、质粒成功转染A549细胞,但Bip在蛋白水平的表达量没有明显改变(P0.05)。结论:1、Sidt2-/-可影响小鼠肺组织形态,表现为细胞的坏死,毛细血管充血及基底膜的增厚,大量炎症细胞的浸润,造成肺部损伤。2、Sidt2作为溶酶体膜蛋白参与了细胞凋亡的进程。Sidt2-/-抑制Bip、p-eif2α、ire1α而抑制了部分内质网应激途径,通过抑制Caspase3 activity、Caspase3表达阻碍了正常细胞凋亡的进程,而使得细胞进入炎症、坏死阶段。其机制尚不十分明确,有待进一步研究。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563

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本文编号：1242125