YAP在哮喘发生过程中的表达情况及其功能探讨

发布时间：2017-12-08 00:31

  本文关键词：YAP在哮喘发生过程中的表达情况及其功能探讨

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【摘要】：目的:哮喘的主要特点是炎症细胞的浸润和组织重构与结构变化,其中包括气管上皮纤维化和ASM细胞增殖。Hippo通路是一个关键的哮喘机制,主要监管并参与细胞增殖,成纤维细胞和平滑肌细胞分化。为了揭示哮喘和Hippo之间是否存在显著性的关系,作为Hippo通路机制中最重要的基因靶点-YAP蛋白的表达,则是主要的指针。我们通过慢性哮喘的支气管平滑肌模型(CAM)对该蛋白的表达进行了研究。方法:1:40只小鼠随机分为空白对照组和模型实验组(利用鸡卵清蛋白(OVA)诱喘制成慢性哮喘的支气管平滑肌模型)。模型建立之后,通过HE染色法对空白对照组和模型实验组的老鼠在肺组织的病理变化方面进行观察。用免疫组织化学(IHC)的方法检测是否存在YAP肺组织蛋白表达。2:通过构建shRNA抑制YAP在mRNA和蛋白水平上的特异性表达,研究溶血性脂肪酸流(LPA)和鞘氨醇-1-磷酸盐(S1P)通过对YAP以及人气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的影响。结果模型实验组的病理变化表明,经过诱喘的小鼠存在大量炎症细胞浸润的现象,主要包括淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的浸润,还存在特定的气道平滑肌增生的现象;IHC结果表明,模型实验组与空白对照组的YAP蛋白质在表达中相比,有显著增加(P0.01)。这一结果进一步证实了通过实时定量PCR(qPCR)和免疫印迹手段分析检测到的YAP基因(P0.01)表达在模型实验组是有上调证据的准确性;实验结果也显示,被shYAP慢病毒条件转染24h及以上的时间可以发现shYAP慢病毒转染对ASMCs细胞内YAP表达的抑制效应,即转染是成功的,其质粒也是有效的;而采用LPA和S1P对细胞的长期以及短期的干预均能够增加ankrd1基因及其下游基因CTGF的表达,从而显著的增加YAP的活性;采用shyap抑制YAP细胞的表达,然后加入对ASMCs干预LPA和S1P,结果发现shyap转染CTGF和ankrd1,YAP和PCNA的表达减少,当YAP受到抑制时,细胞的增殖也一定程度的受到影响;最后采用流式细胞仪检测YAP对ASMCs细胞周期的实验中发现YAP的活性与细胞S期以及G2/M的细胞量存在着一定的相关性,即YAP活性越高,处于S期以及G2/M的细胞量就会越多,进一步说明YAP能够促进细胞的增殖。结论总之,与空白对照组相比,在哮喘中,YAP蛋白具有明显表达,同时该现象可以作为哮喘一个指标,另外通过基因质粒构建的方式也进一步的证明YAP的活性与细胞增殖存在着很大的关联。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R562.25

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 全国儿童哮喘防治协作组;中国城区儿童哮喘患病率调查[J];中华儿科杂志;2003年02期

2 陈爱欢;李昌崇;赵德育;陈志敏;洪建国;;儿童支气管哮喘诊断与防治指南[J];中华儿科杂志;2008年10期

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本文编号：1264394