Rab26调节肺微血管内皮细胞β2-AR和TLR4受体失衡的作用及机制

发布时间：2017-12-08 03:01

  本文关键词：Rab26调节肺微血管内皮细胞β2-AR和TLR4受体失衡的作用及机制

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【摘要】：ALI/ARDS一直是危重病领域非常重视的研究热点,其基本病理生理特点明确为肺微血管内皮细胞、肺泡上皮细胞等的损伤,由此导致肺泡表面活性物质减少,细胞通透性增加、多形核白细胞细胞大量聚集和炎症激活,最终形成广泛的肺水肿等病理表现。可见肺微血管内皮的损伤在急性肺损伤及急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)时处于首要地位,是疾病发生发展的主要原因之一。β2-AR和TLR4这两类受体均存在于PMECs并保持平衡,维持细胞正常生命活动。主要是正常受体如β2-AR被激活,发挥生物性能。而病理情况下,PMECs应答脂多糖等炎症刺激时,两类受体的表达和功能均要发生较大的变化,如TLR4受体将被激活,而正常受体如β2-AR会受损伤,从而打破了两类受体表达及介导炎症功能的平衡,导致炎症失控,最终引起ALI。Rab26为一种小G蛋白,属于Ras超家族,在HEK293细胞中,Rab26可调控细胞表面α(2A)-AR和α(2B)-AR的表达,同时ERK1/2被α(2)-AT激活,通过调节Rab分子和相互作用蛋白,对细胞分泌颗粒的成熟发挥效应。但目前Rab26在肺组织细胞中研究甚少。因此,利用LPS刺激肺微血管内皮后观察细胞表面β2-AR和TLR4表达变化情况,以及相应si RNA沉默和激动剂处理细胞后二者的变化情况,进一步探索两受体失衡的现象,并初步研究Rab26质粒对两种受体失衡的调控作用。研究方法:1.应用β2-AR和TLR4 si RNA转染PMECs,检测两者m RNA和蛋白水平表达。2.应用β2-AR和TLR4激动剂处理PMECs,观察两种受体基因和蛋白表达。3.流式细胞仪检测Rab26质粒转染PMECs的转染效率,并应用RT-PCR和Western Bolt检测其表达情况。4.ELISA检测PMECs处理后上清中各炎症因子的表达。5.BSA检测PMECs渗透性。研究结果:1.LPS处理HPMECs后,细胞表面β2-AR降低,而TLR4表达升高,初步证实受体失衡的现象。2.利用β2-AR和TLR4的si RNA转染PMECs后,检测结果显示β2-AR si RNA作用后细胞表面TLR4表达有上调,炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α表达升高;而TLR4si RNA处理后,HPMECs细胞内β2-AR表达有升高趋势,炎症因子的表达降低。3.依据时间浓度依赖曲线实验结果,β2-AR和TLR4激动剂肾上腺素(EPI)和LPS最佳时间点为6h,浓度为50pmol/L和2ng/ul。结果表明EPI处理后β2-AR表达升高,而TLR4降低;在两种激动剂同时作用后,有一定的逆转效应。4.LPS处理HPMECs后,Rab26m RNA和蛋白表达降低;利用GDP活性质粒转染后,Rab26 m RNA和蛋白表达降低,同时β2-AR表达亦降低,而TLR4表达升高,IL-6、IL-8、TNF-α分泌升高,细胞渗透性增加;GTP活性质粒转染后,Rab26 m RNA和蛋白升高,β2-AR表达亦升高,而TLR4表达降低,IL-6、IL-8、TNF-α分泌减少,胞渗透性降低。结论:1.LPS刺激PMECs后,细胞表面存在β2-AR表达下调而TLR4表达上调失衡的现象;2.Rab26通过调节β2-AR在PMECs表面的转运进而调控LPS所引起的β2-AR和TLR4受体间的失衡。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563.8

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1 陈华萍;Rab26调节肺微血管内皮细胞β2-AR和TLR4受体失衡的作用及机制[D];第三军医大学;2016年

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