基于GR、HSP90研究淫羊藿女贞子协同激素吸入对哮喘大鼠的影响

发布时间：2017-12-08 03:17

  本文关键词：基于GR、HSP90研究淫羊藿女贞子协同激素吸入对哮喘大鼠的影响

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【摘要】：目的基于糖皮质激素受体(Glucocorticoid Recept,GR)及热休克蛋白90(heat shock proteins90,HSP90)研究淫羊藿女贞子煎剂及有效成分提取物协同激素局部干预对哮喘大鼠的影响。方法采用SPF级健康雄性SD大鼠105只,随机分为7组,分别为正常对照组、哮喘模型组、激素干预组、淫羊藿女贞子组(煎剂组)、淫羊藿女贞子合激素组(激素合煎剂组)、淫羊藿女贞子提取物组(提取物组)、淫羊藿女贞子提取物合激素组(激素合提取物组)。除正常组外,其余动物皮下及腹腔注射卵蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、雾化吸入卵蛋白激发,共计5周,建立大鼠哮喘模型。造模结束后各给药组给药4周,分别给予:激素组:生理盐水灌胃同时0.01%布地奈德30min雾化吸入;煎剂组:淫羊藿女贞子(4:3)煎剂3.5g/kg灌胃同时生理盐水30min雾化吸入;激素合煎剂组:淫羊藿女贞子(4:3)煎剂3.5g/kg灌胃同时给予0.01%布地奈德30min雾化吸入;提取物组:淫羊藿女贞子提取物(2:3)10mg/kg灌胃同时生理盐水30min雾化吸入;提取物合激素组:淫羊藿女贞子提取物(2:3)10mg/kg灌胃同时给予0.01%布地奈德30min雾化吸入;正常组和模型组灌胃及雾化吸入生理盐水建立对照。实验第65天处死动物,取血、肺组织及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。采用酶免法检测血清白介素-4(interleukin,IL-4)、免疫球蛋白E(immunoglobulin,IgE)含量;HE、Masson、PAS染色法检测肺组织病理学变化;流式细胞术检测外周血及BALF淋巴细胞凋亡率;流式细胞术检测BALF的GR蛋白含量及GC-GR蛋白结合力;免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)或免疫荧光法(Immunofluorescence,IF)结合Western blot测定肺组织中HSP90、GRα、grβ蛋白表达,荧光定量pcr法检测肺组织hsp90、gr、grα、grβmrna表达,计算gr与hsp90蛋白及mrna比值。结果哮喘大鼠存在着以血清il-4、ige升高(p0.01)为评价指标的气道炎症;病理表现为以支气管壁及平滑肌异常增厚,杯状细胞、胶原纤维增生(p0.01或p0.05)为表现的气道重塑;以balf淋巴细胞凋亡率显著降低(p0.05)为表现的gc敏感性下降;以balfgc-gr蛋白结合力显著降低(p0.05),肺组织grmrna、grα蛋白(if、wb)及mrna表达量显著降低(p0.01或p0.05),grβ(if、wb)、hsp90蛋白(ihc、wb)及mrna表达量下降(p0.01或p0.05),grα/hsp90蛋白(ihc、wb)及mrna,gr/hsp90mrna(p0.01或p0.05)失衡为表现的gc作用途径受损。激素给药后,可降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低支气管壁、平滑肌厚度、杯状细胞计数(p0.01或p0.05);升高balf淋巴细胞凋亡率(p0.05);增加肺组织grα(wb)、grβ(if)、hsp90(wb)蛋白表达量(p0.05)、维持grβ/hsp90(ihc)蛋白平衡(p0.01)。淫羊藿女贞子煎剂及提取物可降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低平滑肌厚度、杯状细胞计数及百分比(p0.01或p0.05);升高血及balf淋巴细胞凋亡率(p0.01或p0.05);增加gr、grα(if、wb)、grβ(if、wb)、hsp90(ihc、wb)蛋白表达量(p0.01或p0.05);增加gr、grα、grβmrna表达量(p0.01或p0.05);维持grα/hsp90(ihc、wb)蛋白平衡(p0.01或p0.05),gr/hsp90、grα/hsp90、grα/grβmrna平衡(p0.01或p0.05)。淫羊藿女贞子煎剂及提取物与激素合用,不仅可以同激素一样降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低支气管壁、平滑肌厚度、杯状细胞计数(p0.01或p0.05);升高balf淋巴细胞凋亡率(p0.01);增加grα(if、wb)、grβ(if、wb)、hsp90(ihc、wb)蛋白表达量(p0.01或p0.05);而且对于激素没有改善作用的指标也有很好的改善效果,具体如下:改善胶原纤维增生(P0.01或P0.05)、降低杯状细胞百分比(P0.01或P0.05)、促进血中淋巴细胞凋亡率(P0.01)、增加BALF GR蛋白表达及GC-GR蛋白结合力(P0.01)、从mRNA水平增加GR、GRα、GRβ、HSP 90表达量(P0.01或P0.05);以及维持GRα/HSP90(IHC、WB)蛋白平衡(P0.01或P0.05),GR/HSP90、GRα/HSP90、GRα/GRβmRNA平衡(P0.01或P0.05)。结论1.引起大鼠哮喘的机制可能与气道炎症,气道重塑,以淋巴细胞凋亡率下降为表现的GC敏感性下降和以GR、HSP90(IHC、WB)表达降低、GR/HSP90比例失调为表现的GC作用途径受损有关。2.布地奈德治疗哮喘的作用环节可能为:改善气道炎症及气道重塑,促进BALF淋巴细胞凋亡,增加组织GRα(WB)、GRβ(IF)、HSP 90(WB)蛋白表达。3.淫羊藿女贞子煎剂及提取物协同激素治疗哮喘的作用环节可能为:改善气道炎症及气道重塑,促进血及BALF淋巴细胞凋亡,增加组织GRα(IF、WB)、GRβ(IF、WB)、HSP90(IHC、WB)蛋白及mRNA表达,维持GR/HSP90蛋白及mRNA比例失衡。4.淫羊藿女贞子有效成分提取物同药对水煎剂一样具有良好的防治哮喘作用。其作用不仅与水煎剂组无明显差异,甚至对部分指标的改善作用更显著。二者作用的差异体现在:淫羊藿女贞子提取物较煎剂有更好的下调血清IL-4水平、上调GRαmRNA表达的作用;淫羊藿女贞子提取物与激素合用较煎剂与激素合用上调GRβmRNA表达的作用更加明显。
【学位授予单位】：首都医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R562.25

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本文编号：1264836