微粒在COPD患者BALF中变化的研究

发布时间：2017-12-25 04:34

本文关键词：微粒在COPD患者BALF中变化的研究　出处：《第三军医大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景与目的：微粒(microparticles, MPs)是一种微小的、富含磷脂的细胞膜碎片,由细胞凋亡或受到刺激后以出芽方式产生,其直径为50nm-2μm,含有多种细胞表面受体以及mRNA等,具有多种生物学功能。在受到刺激或凋亡等情况下能够产生相应微粒的细胞称之为“亲代细胞”(Origin cells)。目前根据来源不同可将微粒分为巨噬细胞微粒(Macrophage-derived microparticles, MMPs)、T淋巴细胞微粒(T Lymphocyte-derived microparticles, TLMPs)、B淋巴细胞微粒(B Lymphocyte-derived microparticles, BLMPs)、血小板微粒(Platelet microparticles, PMPs)以及内皮细胞微粒(Endothelial microparticles, EMPs)等。微粒被认为反映了细胞增殖、受刺激或者凋亡的一个动态平衡,当这种动态平衡由于各种原因被打破后将导致血循环中微粒的大量生成,它们能够携带生物活性分子至靶器官或至其他微粒,刺激产生细胞因子、生长因子、组织因子等,引发多种生物学效应,破坏机体内环境的相对稳定,并在很大程度上影响疾病的发生、发展和转归。新近研究表明,微粒具有促炎、促凝、调节免疫等作用,与炎症、自身免疫性疾病、肿瘤、败血症、疟疾、血液系统疾病等密切相关。而作为人体内唯一由两套血液供应的肺脏,微粒对它的影响可能是巨大的。我们的前期体外研究发现淋巴细胞微粒(LMPs)能抑制人支气管上皮细胞生长,使其生长周期阻滞在G1期,而这种生长周期阻滞作用与P21、P27表达上调有关,并且可能是通过AKT/FOXO1信号通路来实现的；该结果提示,微粒可能与呼吸系统疾病也存在着密切关系，很有必要进行深入研究。慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructivepulmonary disease, COPD）是最常见的慢性气道炎症性疾病，其患病人数多、病死率高并严重影响患者的劳动能力和生活质量；现已证实巨噬细胞、淋巴细胞、内皮细胞及血小板等在COPD疾病进程中具有重要作用。目前上述细胞产生的微粒在COPD患者体内的含量及变化尚未知，有关微粒在COPD中的相关研究可能会大大开阔该领域的研究视野。本研究拟检测不同病期COPD患者支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavage fluid, BALF）中MMPs、TLMPs、BLMPs、PMPs以及EMPs的变化情况，初步探讨各种微粒与COPD的可能关系，以期为临床工作中对COPD病情及预后的评估提供一个新的检测指标。方法：本试验采集COPD患者以及对照者的BALF。利用流式细胞技术检测灌洗液中的MMPs、TLMPs、BLMPs、EMPs、PMPs的绝对计数。具体如下： 1．BALF的采集 1.1BALF的收集：收集COPD不同分期的住院、门诊患者及对照者的BALF，在行纤维支气管镜支气管肺泡灌洗术前先予以阿托品0.5mg肌内注射，并采用2%利多卡因溶液对气道实施局部麻醉。用20ml无菌生理盐水(37℃，PH7.3)选择支气管的第三或者第四级亚段进行灌洗[1][2][3][4][5]。将灌洗液最大限度吸出（回收率约50%），注意在进行支气管肺泡灌洗操作过程中要动作轻柔，不能额外增加研究对象的痛苦。其中含有痰液、血液或者碳沫的标本视为不合格。将符合标准的灌洗液置入冰盒迅速送往实验室，进行离心处理[6]。 1.2BALF预处理：将符合标准的灌洗液在4℃条件下2000×g离心10min，每次离心后留取上清液，丢弃底部较浑浊液体，重复以上操作3次后，将处理好的上清液移入一次性微量离心（EP）管中（100μL/管）。 2．流式细胞技术检测各组BALF中MMPs、TLMPs、BLMPs、PMPs、EMPs的计数：在避光条件下将AECOPD组、COPD稳定期组、对照组BALF各分为6管（100μL/管），在第1管中加入CD14抗人抗体5μL标记MMPs，第2管中加入CD4抗人抗体5μL标记CD4+TLMPs，第3管中加入CD8抗人抗体5μL标记CD8+TLMPs，第4管中加入CD20抗人抗体20μL标记BLMPs，第5管中加入E(5μL)+CD142(5μL)抗人抗体标记PMPs，第6管中加入CD41（5μL）+CD142（5μL）抗人抗体标记EMPs。震荡混匀后，分别上机检测[1][2][3]。结果： 1． BALF采集情况符合入选条件用于研究TLMPs及MMPs变化情况的BALF包括AECOPD组患者35例，COPD稳定期组患者12例，对照组31例。符合入选条件用于研究BLMPs变化情况的BALF包括AECOPD组患者33例，COPD稳定期组患者12例，对照组31例。符合入选条件用于研究PMPs及EMPs的BALF包括AECOPD组患者35例，COPD稳定期组患者12例，对照组20例。 2． COPD患者各种微粒数目变化情况 2.1MMPs数目变化情况：与对照组[45（1-2296）]相比，AECOPD组[906（25-15537）]和COPD稳定期组[737（33-10149）]MMPs数目显著增高（P＜0.05），但AECOPD组MMPs数目与COPD稳定期组相比无统计学意义（P0.05）。多组间比较，MMPs数目具有显著差异（P＜0.05）。 2.2CD8+TLMPs数目变化情况：AECOPD组CD8+TLMPs数目[368（3100-35159）]显著高于COPD稳定期组[1020.5(46-3297)]和对照组[29(3-1012)]（P＜0.05），COPD稳定期组CD8+TLMPs数目显著高于对照组（P＜0.05）。多组间比较，CD8+TLMPs数目具有显著差异（P＜0.05）。 2.3CD4+TLMPs数目变化情况：CD4+TLMPs数目在AECOPD组[494（5-15585）]、COPD稳定期组[953（4-6247）]、对照组[435（3-9863）]无显著差异（P＞0.05）。 2.4BLMPs数目变化情况：AECOPD组BLMPs数目[46（6-1012）]明显低于对照组[237(1-4685)]和COPD稳定期组[114.5(37-876)]（P＜0.05）；而COPD稳定期组BLMPs数目与对照组相比不具有统计学意义（P＞0.05）。多组间比较，BLMPs数目具有显著差异（P＜0.05）。 2.5PMPs数目变化情况：AECOPD组PMPs的数目[81(29-370)]显著低于COPD稳定期组[378.5(56-1260)]和对照组[623.5(74-1531)]（P＜0.05），而COPD稳定期组与对照组相比PMPs数目无统计学意义（P0.05）。多组间比较，PMPs数目有显著差异（P＜0.05）。 2.6EMPs数目变化情况：AECOPD组EMPs数目[202(12-1873)]显著低于COPD稳定期组[493(124-1892)]和对照组[693.5(43-1847)]（P＜0.05），而COPD稳定期组与对照组相比EMPs数目无统计学意义（P0.05）。多组间比较，EMPs数目有显著差异（P＜0.05）。 3．COPD患者BALF中几种微粒数目变化的相关性分析对三组中各种微粒之间的数目变化关系进行相关性分析发现：在AECOPD组中，BLMPs数目变化与CD4+TLMPs数目变化呈低度负相关（rs=-0.344, P＜0.05），其余几种微粒数目的变化之间无明确相关性（P0.05）。在COPD稳定期组中，PMPs数目变化与BLMPs数目变化呈显著正相关（rs=0.755, P＜0.05），其余几种微粒之间数目变化无明确相关性（P0.05）。而对照组中，几种微粒两两之间其数目变化均无相关性（P0.05）。 4．COPD患者BALF中微粒数目变化与年龄、性别、体表面积及吸烟状况的关系：AECOPD组及COPD稳定期组患者BALF中6种微粒数目变化与年龄、性别、体表面积及吸烟与否均无关（P0.05）。结论： 1．COPD患者BALF中BLMPs、EMPs、PMPs数目明显减少，而MMPs、CD8+TLMPs数目明显增多，且这种变化在AECOPD患者中更为明显。提示这几种微粒数目的变化可能与COPD疾病分期有关。 2．COPD患者BALF中CD4+TLMPs数目与对照人群相比无明显变化。 3．AECOPD患者BALF中BLMPs数目减少与CD4+TLMPs数目呈负相关；而在COPD稳定期患者BALF中，，PMPs数目减少与BLMPs数目的变化呈显著正相关。 4．COPD患者BALF中各种微粒数目变化与年龄、性别、体表面积及吸烟与否无关。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9

【引证文献】