慢性阻塞性肺疾病大鼠al-AT和NE的表达及糖皮质激素的治疗作用和机制研究

发布时间：2018-02-08 09:18

  本文关键词： 慢性阻塞性肺疾病 吸烟 NE al-AT 布地奈德 荧光定量PCR　出处：《河北医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：观察中性粒细胞弹性蛋白酶（neutronphil elastase，NE）和α1-抗胰蛋白酶（alpha1antitrypsin，al-AT）在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺组织及肺泡灌洗液中的表达，探讨NE和al-AT在COPD发病中的作用及吸入糖皮质激素对其的影响。 方法： 1采用烟熏法建立COPD动物模型。将30只大鼠分为三组:对照组、烟雾暴露组及布地奈德组。除对照组外，另外两组大鼠每日在熏烟箱内烟雾暴露，每日2次，每一次吸烟20支（1h），持续总共4个月，在最后一个月给予布地奈德组布地奈德雾化治疗。测量大鼠体重、肺功能、左右心室比值、支气管肺泡灌洗液（bronchveolarlavage fluid，BALF）中白细胞数量及分类，并且对肺组织病理形态学进行观察。 2采用ELISA法检测BALF中NE和al-AT的蛋白表达，采用免疫组化方法对大鼠肺组织al-AT和NE蛋白的表达进行检测，，应用逆转录PCR方法（reverse transcription PCR，RT-PCR）对肺组织中al-AT mRNA和NE mRNA表达进行测定，观察布地奈德对al-ATmRNA和NE mRNA表达的影响。 结果： 1三组大鼠实验前体重无明显差异（P0.05）。实验结束后统计三组大鼠体重有显著差异（P0.01）：与对照组比较烟雾暴露组大鼠体重下降（P0.01）；布地奈德组大鼠体重也有明显下降（P0.01），但较烟雾暴露组体重增加(P0.05）。大鼠肺功能检测结果显示Ri、Re、FEV0.3/FVC、Cdy三组之间差异都具有统计学意义（分别P0.01, P0.05, P0.05, P0.05）。烟雾暴露组与对照组比较FEV0.3/FVC、Cdy明显下降(均P0.01)，Re、Ri明显升高（P0.01,P0.05）；与烟雾暴露组比较，布地奈德治疗后Re、 Cdy、FEV0.3/FVC均有改善（均P0.05），Ri虽下降但无统计学意义（P0.05）。烟雾暴露组与对照组比较，BALF中白细胞总数及中性粒细胞百分率显著增多（均P0.01），淋巴百分率下降（均P0.05），内衬间隔（MLI）及支气管壁厚/外径（bronchial wallthickness/diameter, BWT/D）显著增加（P0.01)，平均肺泡数（MAN）显著降低（P0.01)。布地奈德治疗后与烟雾暴露组比较，白细胞总数下降明显（P0.01），各分类细胞百分比、MAN、MLI及BWT/D无明显改变（均P0.05）。 2ELISA试剂盒检测三组大鼠BALF中al-AT和NE的水平。烟雾暴露组与对照组比较，BALF中al-AT的蛋白量降低（P0.01），而NE的蛋白水平升高（P0.01）。布地奈德治疗后与烟雾暴露组比较，al-AT的蛋白量略升高，但无统计学意义（P0.05），NE的蛋白量下降（P0.01）。 3应用免疫组化方法研究al-AT和NE在肺组织中表达。与对照组比较，烟雾暴露组肺组织al-AT的表达降低（P0.01），NE表达升高（P0.01）。与烟雾暴露组比较，布地奈德治疗后al-AT的蛋白量略升高，但无统计学意义（P0.05），NE的蛋白量下降（P0.01）。 4应用RT-PCR检测al-AT mRNA和NE mRNA在大鼠肺组织中表达。烟雾暴露组al-AT mRNA的表达较对照组降低（P0.01），是对照组的（0.55±0.057）倍；与烟雾暴露组比较，布地奈德治疗后al-AT mRNA升高（P0.05），是对照组的（0.69±0.08）倍。烟雾暴露组NE mRNA的表达升高（P0.01），是对照组的(5.18±1.15)倍。与烟雾暴露组比较，布地奈德治疗后NE mRNA降低（P0.05），是对照组的(2.74±0.90)倍。 结论： 1大鼠被动吸烟4个月可成功建立COPD动物模型。给予布地奈德治疗后体重、肺泡内炎性细胞、肺功能等指标较前改善。 2al-AT和NE在COPD发生、发展过程中有明显的变化及联系，在COPD发生发展中起着重要作用。布地奈德治疗通过改善两者失衡状态，可能是治疗COPD有效的机制之一。
[Abstract]:Objective: To observe the effects of neutrophil elastase (neutronphil elastase, NE 1-) and alpha antitrypsin (alpha1antitrypsin, al-AT) in patients with chronic obstructive pulmonary disease (chronic obstructive pulmonary disease, COPD) in rat lung tissue and bronchoalveolar lavage fluid in the expression and role of NE and al-AT in the pathogenesis of COPD and the effects of inhalation of sugar glucocorticoid on it.
Method锛

本文编号：1495114