Caveolin-1在香烟烟雾提取物诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌中的作用

发布时间：2018-02-13 22:18

  本文关键词： Caveolin-1 香烟烟雾提取物 粘蛋白 MUC5AC　出处：《中南大学》2013年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景：气道粘液高分泌是许多慢性气道炎症疾病加重与进展的重要因素,MUC5AC是气道中最重要分泌型粘蛋白。最近实验显示EGFR-PI3K细胞信号通路在脂多糖或中性粒细胞弹性蛋白酶诱导气道上皮细胞MUC5AC基因高表达中有重要作用。吸烟是慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases, COPD)的一个重要病因,其中许多物质造成气道高分泌。我们推测香烟烟雾引起气道上皮粘液高分泌很可能同样与EGFR-PI3K信号通路密切相关。小窝蛋白-1(caveolin-1)是一个胞膜上小窝结构的标志蛋白,广泛表达于多种细胞,作为多种细胞信号的枢纽,参与细胞信号转导与调控,介导细胞生理或病理过程。近年,Caveolin-1被认为是炎症反应中重要调节分子,参与气道炎症发生、发展。而目前尚未见caveolin-1在气道粘液高分泌中作用的报道。我们期望通过本研究探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌的机制,理解caveolin-1在其中的作用。 目的：探讨CSE诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌的发生机制；了解caveolin-1对气道粘蛋白MUC5AC高分泌过程的调控作用；阐明caveolin-1参与气道粘蛋白MUC5AC高分泌调控的可能分子机制。 方法：(1)利用CSE刺激气道上皮细胞HBE16构建气道粘液高分泌体外模型。观察CSE刺激后细胞活性抑制情况,RT-PCR检测MUC5AC mRNA的表达,ELISA蛋白分泌,(?)MUC5AC检测Western blotting磷酸化,(?)EGFR, EGFI磷酸化蛋白的表达情况。Akt, Akt采用抑制剂(AG1478)和PI3K抑制剂(LY294002)预处理气EGFR道上皮细胞观察其对CSE诱导的HBE16,磷酸化,MUC5AC, EGFR, EGFR磷酸化表达的影响。(2)分别转染Akt, Akt过表caveolin-1达质粒至气道上皮细胞和用小窝抑制剂甲基β环糊精HBE16预处理气道上皮细胞(Methyl-β-cyclodextrin, MβCD)再以CSE刺激气30min,道上皮细胞检测HBE16, RT-PCH的表达,(?)MUC5AC mRNA法ELISA检测蛋白分泌,(?)MUC5AC检测Western blotting磷酸化,caveolin-1, EGFR, EGFR磷酸化蛋白的表达。用Akt, Akt和AG1478特异性阻断LY294002和PI3K后,再检测上述指标的表达。EGFR结果：(1)成功构建气道粘液高分泌体外模型； 处理气道10%CSE上皮细胞24h后及蛋白表达明显增加,MUC5AC mRNA磷酸化EGFR及Akt磷酸化增加；预处理后明显降低AG1478诱导气道上皮细胞CSE中及蛋白表达、MUC5AC mRNA磷酸化及Akt磷酸化水平；EGFR预处理后,LY294002诱导的CSE及蛋白表达和MUC5AC mRNAAkt磷酸化下降,但EGFR磷酸化无改变。(2)气道上皮细胞HBE16转染caveolin-1过表达质粒,能够上调CSE诱导的MUC5AC mRNA及蛋白表达和EGFR磷酸化及Akt磷酸化水平；采用MβCD预处理后,能下调CSE诱导的上述指标的表达。AG1478预处理后能明显减低上述情况下的MUC5AC mRNA及蛋白表达、EGFR磷酸化及Akt磷酸化；LY294002能显著减少上述情况下的MUC5AC mRNA、MUCAC蛋白及Akt磷酸化的表达。 结论：(1)CSE诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌与信号通路EGFR-PI3K-Akt有关。(2)Caveolin-1调节CSE诱导气道上皮细胞粘蛋白高分泌,可能是通过诱导EGFR磷酸化,激活PI3K-Akt信号通路发挥作用。
[Abstract]:鑳屾櫙锛氭皵閬撶矘娑查珮鍒嗘硨鏄�璁稿�氭參鎬ф皵閬撶値鐥囩柧鐥呭姞閲嶄笌杩涘睍鐨勯噸瑕佸洜绱，

本文编号：1509229