鱼藤素在哮喘小鼠过敏性气道炎症中的作用及其机制研究

发布时间：2018-02-15 23:10

本文关键词： 哮喘鱼藤素炎症反应 NF-κB信号通路　出处：《浙江大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：哮喘是全球最常见的呼吸系统疾病之一,它是一种以气道炎症和气道高反应为主要特征的慢性呼吸系统疾病,可以累及所有年龄组人群,严重危害人类健康,给病人以及社会带来沉重的经济负担。哮喘的发病机制十分复杂,包括不同淋巴细胞亚群的失平衡,嗜酸性粒细胞的气道浸润,肺泡巨噬细胞功能异常及多种细胞因子和免疫球蛋白过度表达等。尽管近年来对哮喘的机制研究已有了很大的进展,但是目前仍然缺乏有效的治疗手段来很好地控制较难治的哮喘及其相关的炎症反应。近年来,许多传统中药对于哮喘的治疗作用逐渐受到人们的关注。鱼藤素是豆科藤本植物家族的重要组成部分。在肿瘤小鼠模型中,它能够通过抑制磷脂酰肌醇3激酶信号通路产生抗增殖作用。不仅如此,也有文献报道鱼藤素能够有效地抑制核转录因子kappaB(NF-κB)信号通路,具有很强的抗炎作用。目前,鱼藤素在哮喘相关的过敏性气道炎症反应中的作用及其机制尚未明确。本研究中,我们以卵白蛋白致敏联合雾化激发的方法建立小鼠急性哮喘模型,用鱼藤素或地塞米松进行腹腔注射治疗哮喘小鼠。首先,我们通过小鼠肺泡灌洗及细胞分类计数方法明确气道炎症细胞的分类及浸润程度,通过肺组织病理切片进行苏木素-伊红和过碘酸-希夫染色方法分析肺组织炎症细胞浸润及黏液蛋白分泌,通过无创肺功能仪检测哮喘小鼠的气道高反应性。然后,通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清免疫球蛋白和细胞因子水平,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测辅助型T细胞(Th)2型细胞因子及炎症相关因子的基因表达,通过流式细胞术检测胸腺基质淋巴细胞生成素的表达,探讨鱼藤素对哮喘小鼠体内炎症反应的作用。随后,我们进一步用鱼藤素处理人支气管上皮细胞(BEAS-2B),通过细胞活性检测试验检测药物的细胞毒性、通过RT-PCR方法检测炎症相关因子的基因表达。最后,我们用鱼藤素和NF-κB抑制剂——BAY 11-7082单独或共同处理BEAS-2B细胞,用免疫印迹法检测NF-κB信号通路上下游蛋白的表达,探讨鱼藤素对于哮喘相关炎症反应的作用及分子机制。本研究发现:在哮喘模型小鼠体内,鱼藤素能够有效的减少卵白蛋白诱导的炎症细胞浸润,减轻肺组织的炎症反应和黏液生成,抑制气道高反应性,减少血清免疫球蛋白和Th2型细胞因子的表达水平,并呈现浓度依赖的变化。同时,我们在体内和体外实验中发现,鱼藤素能够下调与NF-κB信号通路密切相关的炎症基因的表达,增强κB抑制因子α(IκBα)与NF-κB成员的结合能力,使NF-1κB p65三聚体持续处于失活状态,进而抑制NF-κB p65和IκBα的磷酸化,减少IκBα的降解和p65入核,最终抑制NF-κB信号通路的活化。体外实验还提示,鱼藤素能够与BAY 11-7082产生协同作用,共同抑制气道上皮细胞NF-κB信号通路的活化。本研究证明,鱼藤素能够通过抑制NF-κB信号通路减轻哮喘相关的过敏性气道炎症反应,可能成为一种有效的哮喘治疗药物。
[Abstract]:In recent years , we have studied the expression of immune globulin and cytokines in asthmatic mice by means of ELISA . In recent years , we have studied the expression of immune globulin and cytokines in asthmatic mice by means of flow cytometry . In this study , it can be used to reduce the allergic airway inflammation associated with asthma by inhibiting NF - 魏B signaling pathway , which may be an effective drug for asthma treatment .

【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R562.25

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