苦参碱联合番茄红素对内毒素诱导的急性肺损伤防护作用的研究及机制初探

发布时间：2018-03-13 01:24

本文选题：急性肺损伤　切入点：内毒素　出处：《天津医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)是急性炎症导致的肺部损伤,其病理改变包括中性粒细胞的聚集、炎症介质的释放、肺血管通透性增加以及肺间质水肿。ALI的发病机制可概括为免疫系统的损伤和补体系统的过度激活。ALI临床表现为急性呼吸窘迫综合症(acute respiratory distress syndrome,ARDS),预后差,病死率可达40%左右。目前对于ALI/ARDS病理生理的认识在不断深入,但仍然缺乏有效的治疗方法控制该病的发病率和死亡率。因此,迫切需要更加有效的治疗药物或治疗方法以改善本病的预后。苦参碱(Matrine)是中药苦参的主要活性成分,已被证明具有多种生物学特性,包括抗炎和免疫调节等。番茄红素(Lycopene)是一种天然的类胡萝卜素,是胡萝卜素最重要的成分之一,具有多种生理功能,如抗氧化、清除自由基等。本文研究了苦参碱联合番茄红素对内毒素诱导的ALI的保护作用,并对其作用机制进行初步探索,旨在寻找治疗ALI有效的副作用小的药物,为临床研究提供参考依据。方法健康雄性小鼠120只,随机分为6组:正常组(NM组),模型组(LPS组),地塞米松组(DEX组),苦参碱组(Matrine组),番茄红素组(Lycopene组),联合用药组(UNION组),每组20只。NM组和LPS组小鼠预先7天每天使用无菌生理盐水灌胃,DEX组小鼠腹腔注射地塞米松,剩余其他治疗组则每天灌胃给药,药物使用剂量分别为地塞米松5mg/kg,苦参碱25mg/kg,番茄红素1mg/kg,苦参碱25mg/kg+番茄红素组1mg/kg;最后一次给药半小时后正常组小鼠气管滴注无菌生理盐水作为对照,其他剩余组小鼠给与气管滴注内毒素(Lipopolysaccharides,LPS,100μg/50μl)建立ALI模型;在给予LPS半小时后开始药物治疗组仍每天予以药物治疗,于ALI模型建立后6h、1d、3d、7d各小组小鼠使用乙醚麻醉并快速解剖取肺组织;测定湿/干重比即肺水含量判定小鼠肺组织水肿情况;取右下肺HE染色观察病理改变;ELISA试剂盒分别检测小鼠肺组织匀浆中炎性细胞因子IL-6和TNF-α的含量,RT-PCR检测IL-6、TNF-α及NF-κB基因表达水平,免疫组化法检测肺组织NF-κB蛋白表达水平;MDA、MPO和GSH试剂盒检测小鼠肺组织中氧化反应物质的活性改变。结果实验结果表明,小鼠气管滴注LPS后小鼠肺水含量增大,炎性细胞因子IL-6、TNF-α含量及基因表达增多,NF-κB基因表达和蛋白表达增多,氧化反应指标MDA含量、MPO活性升高,GSH活性降低,小鼠病理切片示肺组织结构改变,肺泡壁增厚、肺泡结构遭到破坏、炎症细胞增多、肺泡腔内蛋白质渗出增多。一、给予Matrine和Lycopene联合治疗后6h、1d和3d时肺水含量较LPS组下降(6h 2.04±0.35 vs 2.85±0.38,1d 2.03±0.04 vs 3.07±0.12,3d 1.97±0.26 vs2.78±0.06),差异有统计学意义(P0.05),与DEX组比较差异无统计学意义(P0.05);二、Matrine和Lycopene联合治疗可改善小鼠肺组织结构改变,肺泡壁增厚、肺泡结构遭到破坏、炎症细胞增多、肺泡腔内蛋白质渗出增多情况好转,病理评分较LPS组降低明显(6h 0.59±0.04 vs 1.05±0.07,1d 0.57±0.11 vs1.22±0.05,3d 0.59±0.11 vs 1.18±0.11,7d 0.64±0.25 vs 1.01±0.10),差异有统计学意义(P0.05),与DEX组比较差异无统计学意义(P0.05);三、ELISA结果显示与LPS组比较Matrine和Lycopene联合治疗组IL-6(ng/L)含量降低(6h17.68±1.51 vs 25.32±0.73,1d 19.63±2.40 vs 29.60±2.42,3d 18.74±2.40 vs23.98±1.40,7d 16.53±1.71 vs 20.69±0.61)和TNF-α(ng/L)含量降低(6h141.06±19.01 vs 197.19±22.83,1d 184.07±9.05 vs 231.85±7.56,3d 107.26±6.27 vs161.32±16.36,7d 123.72±8.79 vs 159.60±11.55);免疫组化显示NF-κB蛋白表达水平降低(6h 4.50±2.12 vs 9.50±0.71,1d 6.15±0.21 vs 11.00±1.41,3d 6.15±0.35 vs10.50±2.12,7d 5.80±0.28 vs 9.00±1.41),差异有统计学意义(P0.05),与DEX组比较差异无统计学意义(P0.05);RT-PCR结果显示UNION组较LPS组IL-6基因表达水平降低(6h 3.14±0.29 vs 4.06±0.19,1d 3.42±0.20 vs 4.43±0.13,3d2.63±0.28 vs 3.45±0.32,7d 2.49±0.05 vs 3.32±0.26)、TNF-α基因表达水平降低(6h2.52±0.15 vs 3.29±0.03,1d 2.67±0.18 vs 3.40±0.18,3d 2.39±0.09 vs 2.98±0.06,7d2.13±0.14 vs 2.80±0.11)及NF-κB基因表达水平降低(6h 2.00±0.17 vs 2.30±0.07,1d 1.58±0.22 vs 2.47±0.13,3d 1.48±0.16 vs 2.09±0.20,7d 1.60±0.09 vs 2.00±0.18);四、Matrine和Lycopene联合治疗与LPS组比较降低肺组织匀浆氧化物质MDA(nmol/mg)含量(6h 11.33±0.38 vs 16.43±1.08,1d 14.78±0.38 vs 18.26±0.64,3d13.05±0.15 vs 16.65±0.30,7d 10.28±1.58 vs 14.25±0.15)和MPO(U/g)活性(6h8.15±1.35 vs 9.75±0.47,1d 8.07±0.80 vs 9.66±0.44,3d 8.49±0.44 vs 10.00±0.24,7d7.84±0.56 vs 10.04±0.21)、升高GSH(mg/L)活性(6h 25.35±2.92 vs 18.41±2.08,1d 26.55±3.86 vs 17.17±2.51,3d 26.85±0.80 vs 17.12±1.16,7d 28.07±1.61 vs20.61±1.03),差异有统计学意义(P0.05),与DEX组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论苦参碱联合番茄红素对LPS诱导的ALI具有保护作用,其保护作用表现为减少炎性因子的产生和抑制氧化应激,作用机制可能与苦参碱联合番茄红素抑制NF-κB信号通路的激活相关。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R563.8

【参考文献】